BRET ?

[Depsined]

Salut salut ! 

Dites, je ne comprend pas vraiment pourquoi, dans le cas d'un agoniste inverse, l'intensité du signal augmente en BRET ; Pour moi, agoniste inverse = découplage de la protéine G du RCPG = éloignement de la dite protG = diminution du signal, du coup je ne vois pas trop 

Merci d'avance !

Edited April 14, 2020 by Depsined

[Chat_du_Cheshire]

Hello, ça dépend d'où son placés les signaux, tu as le QCM ? 

[Depsined]

Salut @Chat_du_Cheshire, voici : 

  

Edited April 14, 2020 by Depsined

[Chat_du_Cheshire]

il y a 49 minutes, Depsined a dit :

Salut @Chat_du_Cheshire, voici : 

  

en effet c'est pas logique, l'agoniste inverse va rapprocher les 2 sous-unités donc le signal ne peut pas diminuer... en plus on sait même pas si le récepteur a une activité constitutive ou pas

 

l'item vient d'où?^^

[Depsined]

il y a 2 minutes, Chat_du_Cheshire a dit :

en effet c'est pas logique, l'agoniste inverse va rapprocher les 2 sous-unités donc le signal ne peut pas diminuer... en plus on sait même pas si le récepteur a une activité constitutive ou pas

 

l'item vient d'où?^^

Non non, l'item est bien faux (cc purpan 2017-2018), mais justement je ne comprend pas pourquoi 

[Chat_du_Cheshire]

il y a 3 minutes, Depsined a dit :

Non non, l'item est bien faux (cc purpan 2017-2018), mais justement je ne comprend pas pourquoi 

ok parfait ça me rassure !

 

Alors pour BRET il y a 2 situations possibles :

• soit on met le donneur d'énergie sur le récepteur et le receveur sur la protéine G
• soit on met le donneur sur la sous-unité alpha de la protéine G et le receveur sur bêta/gamma

C'est super important de bien voir dans quelle situation on est parce que ça change tout.

 

Et justement tu écris dans le sujet :

Il y a 3 heures, Depsined a dit :

Pour moi, agoniste inverse = découplage de la protéine G du RCPG = éloignement de la dite protG = diminution du signal

c'est bien vrai mais seulement dans le cas où on met le donneur d'énergie sur le récepteur et le receveur sur la protéine G ! Or ici ce n'est pas ce qui est dit, on ne peut donc pas appliquer ce raisonnement !

 

Imagine dans l'item qu'à la place de l'agoniste inverse on avait mis un agoniste : il y aurait eu dissociation de la protéine G, éloignement d'alpha et gamma donc diminution du signal.

Ben ici c'est l'inverse car on met un agoniste inverse, alpha et gamma se collent donc le signal augmente

 

 

[Depsined]

il y a 13 minutes, Chat_du_Cheshire a dit :

ok parfait ça me rassure !

 

Alors pour BRET il y a 2 situations possibles :

• soit on met le donneur d'énergie sur le récepteur et le receveur sur la protéine G
• soit on met le donneur sur la sous-unité alpha de la protéine G et le receveur sur bêta/gamma

C'est super important de bien voir dans quelle situation on est parce que ça change tout.

 

Et justement tu écris dans le sujet :

c'est bien vrai mais seulement dans le cas où on met le donneur d'énergie sur le récepteur et le receveur sur la protéine G ! Or ici ce n'est pas ce qui est dit, on ne peut donc pas appliquer ce raisonnement !

 

Imagine dans l'item qu'à la place de l'agoniste inverse on avait mis un agoniste : il y aurait eu dissociation de la protéine G, éloignement d'alpha et gamma donc diminution du signal.

Ben ici c'est l'inverse car on met un agoniste inverse, alpha et gamma se collent donc le signal augmente

 

 

Donc l'agoniste inverse induit bien le découplage de la protG de son récepteur, mais aussi le rapprochement des sous unités de la protG ? 

[Chat_du_Cheshire]

il y a 45 minutes, Depsined a dit :

Donc l'agoniste inverse induit bien le découplage de la protG de son récepteur, mais aussi le rapprochement des sous unités de la protG ? 

pas forcément, qui dit qui découplage dit couplage au préalable donc dit récepteur constitutivement actif, or tous les récepteurs ne le sont pas

 

Dans les QCM Bret avec agoniste inverse, faut juste avoir le réflexe de se dire :

• soit on met le donneur d'énergie sur le récepteur et le receveur sur la protéine G  ==> dans ce cas on va surement me parler de récepteur constitutivement actif donc de découplage
• soit on met le donneur sur la sous-unité alpha de la protéine G et le receveur sur bêta/gamma  ==> l'agoniste inverse empêche la dissociation de la protéine G

 

 

[Depsined]

D'accord, merci bcp @Chat_du_Cheshire ! 

[Chat_du_Cheshire]

au plaisir

[Leïlaa]

@Un_baobab @Chat_du_Cheshire please help  Je n'ai jamais eu de problème avec ça avant mais là je bug car je suis tombée sur ce fameux item de P2018 dont vous avez parlé plus haut et le fait qu'on soit avec une protéine Gi me perturbe... Donc plusieurs questions me sont venues afin d'éclaircir tout ça :

Révélation

Je précise que pour moi, un RCPG + pGi en absence de ligand sont liés et la ssu alpha est active. Mais d'après ce que j'ai compris, ce n'est pas le cas...

 

- Est-ce qu'un RCPG couplé à une pGi est couplé à cette dernière même en l'absence de ligand ?

- Est-ce que la protéine G est activée en l'absence de ligand ?

- Lorsqu'un agoniste se fixe, il se passe quoi ? On est d'accord qu'il supprime l'activité constitutive (si tant est qu'il y en ait une du coup...) ?

- Lorsque la ssu alpha est activée on est d'accord qu'elle est loin de béta/gamma donc le signal est plus faible. Mais du coup lorsqu'on inhibe un rcp Gi (par un antagoniste/agoniste inverse) alors la ssu alpha se refixe à béta/gamma et il y a réaugmentation du signal non ?

 

EN GROS : Est-ce que la pGi se "comporte" comme la pG de cette diapo ? 

Révélation

 

Après j'ai bien compris ce que tu expliques plus haut à propos de l'agoniste inverse, le placement de la rénilla et la luciférase etc mais juste j'ai du mal à l'appliquer à la pGi je m'aperçois que ce n'est pas clair pour moi et j'aurais besoin d'un bon récap !!

 

Edited June 12, 2020 by Leïlaa

[Chat_du_Cheshire]

Il y a 2 heures, Leïlaa a dit :

Je précise que pour moi, un RCPG + pGi en absence de ligand sont liés et la ssu alpha est active. Mais d'après ce que j'ai compris, ce n'est pas le cas...

non, pas toujours, et ce n'est pas le cas pour l'exemple de la morphine : c'est la liaison de la morphine qui entraîne l'activation de Gi

 

J'avais fait ce recap' l'an dernier :

 

• EN L'ABSENCE DE LIGAND
  • La vision classique nous dit qu'il n'y a pas d'association directe entre le récepteur et la protéine G.
  • En réalité, on sait qu'au niveau de la membrane, le récepteur est associé même en l'absence de ligand et donc forme des pré-complexes de toutes les sous-unités (on peut trouver toutes les combinaisons possibles au niveau de la membrane)
• EN PRÉSENCE D'UN LIGAND (ex : morphine)
  • C'est uniquement le couple récepteur/sous-unité αi qui va provoquer l'effet donc on ne sait pas très bien à quoi servent les autres pré-complexes formés qui sont toujours à la membrane mais qui eux ne peuvent pas signaliser sous l'effet de la morphine. L'hypothèse est que leur formation ne se fait pas au niveau de la membrane mais dans le RE. Et donc la formation de ce pré-complexe permet le trafic des récepteurs = amener le récepteur à la membrane.
  • Et ainsi il a été démontré qu'il n'y a pas de dissociation de la protéine G (pas β/ɣ d'un côté et α de l'autre). On a seulement une modification de conformation qui entraîne un éloignement des sous-unités mais elles restent associées.
• ACTIVITÉ CONSTITUTIVE : elle est la conséquence pharmacologie du pré-couplage, avec une absence de ligand
  • Certains récepteurs, même s'ils ne sont pas stimulés par un ligand, sont capables de signaliser. Et comme expliqué au-dessus, les sous-unités de la protéine G ne sont pas dissociées sinon il n'y aurait quasiment pas de signal BRET. Cela a permis de comprendre le fonctionnement des agonistes inverses : ils entraînent une suppression de l'activité constitutive par découplage de la protéine G !
  • Ainsi on comprend que si le récepteur est constitutivement actif, la sous-unité α fixe le GTP en l'absence de ligand.

 

Dis-moi si ça coince encore, et où surtout haha

 

[Lemillion]

il y a 12 minutes, Chat_du_Cheshire a dit :

Et ainsi il a été démontré qu'il n'y a pas de dissociation de la protéine G (pas β/ɣ d'un côté et α de l'autre). On a seulement une modification de conformation qui entraîne un éloignement des sous-unités mais elles restent associées.

c'est la vision morderne ça ?

c'est la première fois que je lis ça mdrr

c'est dans le diapo ?

Edited June 12, 2020 by Lemillion

[Chat_du_Cheshire]

il y a 2 minutes, Lemillion a dit :

c'est la vision morderne ça ?

c'est la première fois que je lis ça mdrr

c'est dans le diapo ?

oui c'est dans la partie pré-couplage, et c'est pas écrit dans la diapo ça vient des explications orales du prof, par contre ça change rien pour les QCM BRET cette info bien sûr!

[Lemillion]

il y a 1 minute, Chat_du_Cheshire a dit :

oui c'est dans la partie pré-couplage, et c'est pas écrit dans la diapo ça vient des explications orales du prof, par contre ça change rien pour les QCM BRET cette info bien sûr!

ok merci Felis silvestris catus

[Chat_du_Cheshire]

il y a 1 minute, Lemillion a dit :

Felis silvestris catus

merci wiki mdrrr

[Lemillion]

à l’instant, Chat_du_Cheshire a dit :

merci wiki mdrrr

mdrrr je ne peux nier

[Leïlaa]

Alors, oui c'est déjà plus clair, mais j'ai besoin de quelques précisions : (NB : ce post me sert aussi de récap dsl s'il est un peu long... si tu peux confirmer c'est cool sinon tu peux juste lire les questions qu'il me reste que j'ai mise en gras)

 

il y a 54 minutes, Chat_du_Cheshire a dit :

Et ainsi il a été démontré qu'il n'y a pas de dissociation de la protéine G (pas β/ɣ d'un côté et α de l'autre). On a seulement une modification de conformation qui entraîne un éloignement des sous-unités mais elles restent associées.

Ok j'avais pas saisi la nuance entre "éloignement" et "dissociation" mais du coup puisque ce n'est qu'un éloignement, ça ne change en rien le fait qu'on aura une diminution du signal BRET (dans le cas où accepteur et receveur sont fixé sur la ssu alpha et béta/gamma) ?

 

Pour le reste c'est clair. Si j'ai bien compris, en fait tous les RCPG fonctionnent pareil en gros. Et il y a 2 catégories : ceux qui ont une activité constitutives et ceux qui n'en ont pas :

• Si pas d'activité spécifique : la fixation d'un agoniste active la pG --> éloignement de la ssu alpha lié au GTP = signalisation
• Si activité constitutive : la fixation d'un ligand entraine la désactivation de la pG donc hydrolyse GTP->GDP, la ssu alpha se rapproche de ses compères = arrêt de la signalisation

Mais du coup, pour un rcp ayant une activité constitutive, existe-t-il des agonistes "tout court" ou les seuls ligands sont des agonistes inverses ? (Je me doute que je vais trop loin et qu'on me demanderas pas ça au concours mais c'est plus pour bien comprendre et un peu de curiosité oups)

Question bête, il en existe oui justement les opioïdes aha !

Mais du coup ils servent à quoi puisque l'activité est déjà là même sans qu'ils se lient au rcp ? Ils amplifient l'activité de la pG ?

 

DONC pour revenir à ma morphine :

On est bien d'accord que les rcp mu opioïdes ont une activité constitutive ? Donc lorsqu'un agoniste inverse vient se lier au rcp, cela inactive la pG donc rapprochement des 3 ssu donc augmentation du signal ! Ca y est je l'ai

Au passage, sur un RCPG couplé à Gi, est-ce qu'on peut dire qu'un agoniste de Gi a la même action qu'un antagoniste de Gs ?

 

En tout cas merciii de ta réponse ! J'étais vrmt en PLS (petit moment de panique) ! En même temps -0.6 à un QCM à 4 jours du concours c'est pas ouf...

 

Edited June 12, 2020 by Leïlaa

[Chat_du_Cheshire]

Il y a 7 heures, Leïlaa a dit :

Alors, oui c'est déjà plus clair, mais j'ai besoin de quelques précisions : (NB : ce post me sert aussi de récap dsl s'il est un peu long... si tu peux confirmer c'est cool sinon tu peux juste lire les questions qu'il me reste que j'ai mise en gras)

 

Ok j'avais pas saisi la nuance entre "éloignement" et "dissociation" mais du coup puisque ce n'est qu'un éloignement, ça ne change en rien le fait qu'on aura une diminution du signal BRET (dans le cas où accepteur et receveur sont fixé sur la ssu alpha et béta/gamma) ?

 

Pour le reste c'est clair. Si j'ai bien compris, en fait tous les RCPG fonctionnent pareil en gros. Et il y a 2 catégories : ceux qui ont une activité constitutives et ceux qui n'en ont pas :

• Si pas d'activité spécifique : la fixation d'un agoniste active la pG --> éloignement de la ssu alpha lié au GTP = signalisation
• Si activité constitutive : la fixation d'un ligand entraine la désactivation de la pG donc hydrolyse GTP->GDP, la ssu alpha se rapproche de ses compères = arrêt de la signalisation

Mais du coup, pour un rcp ayant une activité constitutive, existe-t-il des agonistes "tout court" ou les seuls ligands sont des agonistes inverses ? (Je me doute que je vais trop loin et qu'on me demanderas pas ça au concours mais c'est plus pour bien comprendre et un peu de curiosité oups)

Question bête, il en existe oui justement les opioïdes aha !

Mais du coup ils servent à quoi puisque l'activité est déjà là même sans qu'ils se lient au rcp ? Ils amplifient l'activité de la pG ?

 

DONC pour revenir à ma morphine :

On est bien d'accord que les rcp mu opioïdes ont une activité constitutive ? Donc lorsqu'un agoniste inverse vient se lier au rcp, cela inactive la pG donc rapprochement des 3 ssu donc augmentation du signal ! Ca y est je l'ai

Au passage, sur un RCPG couplé à Gi, est-ce qu'on peut dire qu'un agoniste de Gi a la même action qu'un antagoniste de Gs ?

 

En tout cas merciii de ta réponse ! J'étais vrmt en PLS (petit moment de panique) ! En même temps -0.6 à un QCM à 4 jours du concours c'est pas ouf...

 

dac j'ai tout lu, je reprends ça demain au réveil car là je suis pas frais je vais faire des fautes je sens mdrrr

[Chat_du_Cheshire]

Il y a 18 heures, Leïlaa a dit :

Ok j'avais pas saisi la nuance entre "éloignement" et "dissociation" mais du coup puisque ce n'est qu'un éloignement, ça ne change en rien le fait qu'on aura une diminution du signal BRET (dans le cas où accepteur et receveur sont fixé sur la ssu alpha et béta/gamma) ?

oui ça change rien, ça c'est un détail et apparemment on vous l'a pas dit cette année

 

Il y a 18 heures, Leïlaa a dit :

• Si pas d'activité spécifique : la fixation d'un agoniste active la pG --> éloignement de la ssu alpha lié au GTP = signalisation
• Si activité constitutive : la fixation d'un ligand entraine la désactivation de la pG donc hydrolyse GTP->GDP, la ssu alpha se rapproche de ses compères = arrêt de la signalisation

non attend là tu mélanges les visions classique et moderne, reprenons :

 

VISION CLASSIQUE :

Il y a 18 heures, Leïlaa a dit :

pas d'activité spécifique : la fixation d'un agoniste active la pG --> éloignement de la ssu alpha lié au GTP = signalisation

 

 

VISION MODERNE : là il y a aura des récepteurs constitutivement actifs, d'autres pas

• Il y a 19 heures, Chat_du_Cheshire a dit :

  EN PRÉSENCE D'UN LIGAND (ex : morphine)

  • C'est uniquement le couple récepteur/sous-unité αi qui va provoquer l'effet donc on ne sait pas très bien à quoi servent les autres pré-complexes formés qui sont toujours à la membrane mais qui eux ne peuvent pas signaliser sous l'effet de la morphine. L'hypothèse est que leur formation ne se fait pas au niveau de la membrane mais dans le RE. Et donc la formation de ce pré-complexe permet le trafic des récepteurs = amener le récepteur à la membrane.

• Il y a 19 heures, Chat_du_Cheshire a dit :

  ACTIVITÉ CONSTITUTIVE : elle est la conséquence pharmacologie du pré-couplage, avec une absence de ligand

  • Certains récepteurs, même s'ils ne sont pas stimulés par un ligand, sont capables de signaliser. Et comme expliqué au-dessus, les sous-unités de la protéine G ne sont pas dissociées sinon il n'y aurait quasiment pas de signal BRET. Cela a permis de comprendre le fonctionnement des agonistes inverses : ils entraînent une suppression de l'activité constitutive par découplage de la protéine G !
  • Ainsi on comprend que si le récepteur est constitutivement actif, la sous-unité α fixe le GTP en l'absence de ligand.

   

 

 

 

 

Il y a 18 heures, Leïlaa a dit :

Mais du coup ils servent à quoi puisque l'activité est déjà là même sans qu'ils se lient au rcp ? Ils amplifient l'activité de la pG ?

le prof n'en parle pas mais j'avais fait mes recherches sur ça et en fait ça dépend des agonistes, tous n'auront pas le même effet (certains vont rien changer, d'autres peuvent augmenter l'effet etc)

Il y a 18 heures, Leïlaa a dit :

On est bien d'accord que les rcp mu opioïdes ont une activité constitutive ?

ça dépend de l'énoncé que le prof te donnera ! Il y a des QCM où c'était le cas mais en cours il a présenté la chose différemment, il y avait pré-couplage mais sans effet et c'est la liaison de la morphine qui fait signaliser la prot Gi

Il y a 19 heures, Leïlaa a dit :

Donc lorsqu'un agoniste inverse vient se lier au rcp, cela inactive la pG donc rapprochement des 3 ssu donc augmentation du signal ! Ca y est je l'ai

yep et aussi cela découple la prot G du récepteur !

 

Il y a 19 heures, Leïlaa a dit :

Au passage, sur un RCPG couplé à Gi, est-ce qu'on peut dire qu'un agoniste de Gi a la même action qu'un antagoniste de Gs ?

'' vous avez 4 heures '' mdrrr plus sérieusement non car un agoniste a une activité intrinsèque alors qu'un antagoniste non

[Leïlaa]

Il y a 2 heures, Chat_du_Cheshire a dit :

VISION MODERNE : là il y a aura des récepteurs constitutivement actifs, d'autres pas

Ok mais du coup, pour ceux qui n'ont pas d'activité constitutive, ils ont le même fonctionnement que dans la vision classique  à part que dans la vision classique on précise pas que les ssu béta/gamma aussi peuvent avoir des effets

 

Il y a 2 heures, Chat_du_Cheshire a dit :

'' vous avez 4 heures '' mdrrr plus sérieusement non car un agoniste a une activité intrinsèque alors qu'un antagoniste non

Mdrrr ok oui je vois mais au niveau du signal qui est transmit, là c'est le même ?

 

pour le reste c'est plus clair merci beauuuuucouuup le chat !!

[Chat_du_Cheshire]

il y a 5 minutes, Leïlaa a dit :

Ok mais du coup, pour ceux qui n'ont pas d'activité constitutive, ils ont le même fonctionnement que dans la vision classique  à part que dans la vision classique on précise pas que les ssu béta/gamma aussi peuvent avoir des effets

non pas tellement, dans la vision moderne de la morphine on voit qu'il y a un pré-couplage, il n'y a pas ça dans la vision classique

il y a 6 minutes, Leïlaa a dit :

Mdrrr ok oui je vois mais au niveau du signal qui est transmit, là c'est le même ?

j'aurais tendance à dire que non, l'antagoniste ne provoque pas une signalisation intra-cellulaire comme le fait l'agoniste

[Leïlaa]

il y a 4 minutes, Chat_du_Cheshire a dit :

non pas tellement, dans la vision moderne de la morphine on voit qu'il y a un pré-couplage, il n'y a pas ça dans la vision classique

 

Ahhh oui okkk j'avais pas fait le lien ! En gros elle est toujours précouplée mais la pG est pas toujours active sans ligand ! Et du coup c'est le cas de tous les RCPG dans la vision moderne c'est ça ?

 

il y a 5 minutes, Chat_du_Cheshire a dit :

j'aurais tendance à dire que non, l'antagoniste ne provoque pas une signalisation intra-cellulaire comme le fait l'agoniste

Hmm oui ok je vois

[Chat_du_Cheshire]

il y a 26 minutes, Leïlaa a dit :

En gros elle est toujours précouplée mais la pG est pas toujours active sans ligand

yep

il y a 26 minutes, Leïlaa a dit :

Et du coup c'est le cas de tous les RCPG dans la vision moderne c'est ça ?

nooon c'est ce que j'explique au dessus, certains ont une activité constitutive et d'autres pas

[Leïlaa]

à l’instant, Chat_du_Cheshire a dit :

nooon c'est ce que j'explique au dessus, certains ont une activité constitutive et d'autres pas

Oui mais ils sont tous précouplés nan ? Et la protéine G n'est pas toujours active sans ligand (donc pas toujours d'activité consitutive) mais elle est active ou pas elle est précouplée au RCPG non ?