danadal Posted February 19 Share Posted February 19 Bonsoir, j’ai une question concernant la technique de dot blot et western blot, j’arrive pas a savoir si elles permettent de détecter des Ac ou des Ag ? Je trouve que c’est pas assez claire dans le cours… Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur Jujuuu Posted February 19 Tuteur Share Posted February 19 Bonsoir @danadal, tu devrais plutôt poser ta question dans la partie UE8/11 Recherche pour avoir de meilleures explications, bon courage! evalanine and Soulal 2 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
danadal Posted February 20 Author Share Posted February 20 Mince merci quand mm Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Aaronigashima Posted February 20 Share Posted February 20 11 hours ago, danadal said: Bonsoir, j’ai une question concernant la technique de dot blot et western blot, j’arrive pas a savoir si elles permettent de détecter des Ac ou des Ag ? Je trouve que c’est pas assez claire dans le cours… Les DOT et Western Blot servent à analyser des protéines (principalement les Ag mais il est aussi possible de détecter des Ac). Tu dois probablement confondre avec Elisa Sandwich qui sert à identifier des Ag exclusivement alors que pour l’identification d’Ac on utilisera la technique d’Elisa indirecte. (pour petit rappel EliSpot sert à numerer les cellules sécrétrices d’Ag comme les cytokines par exemple) J’espere que ça ait pu t’aider ! danadal and MensSanaCorporeSano 1 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
loveyouth Posted February 21 Share Posted February 21 Le 20/02/2024 à 10:21, Aaronigashima a dit : Les DOT et Western Blot servent à analyser des protéines (principalement les Ag mais il est aussi possible de détecter des Ac). Tu dois probablement confondre avec Elisa Sandwich qui sert à identifier des Ag exclusivement alors que pour l’identification d’Ac on utilisera la technique d’Elisa indirecte. (pour petit rappel EliSpot sert à numerer les cellules sécrétrices d’Ag comme les cytokines par exemple) J’espere que ça ait pu t’aider ! Et du coup parmis ceux que tu a cité lesquels reconnaissent des epitopes conformationel et lesquels séquentiel je suis pas sur d’avoir bien compris stp .merci d’avance! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur Vector Posted February 21 Tuteur Share Posted February 21 Heey @loveyouth ! Pour pouvoir identifier des épitopes conformationnels, il faut que les protéines soient dans leur conformation native (avec les différentes sous-unités, les ponts disulfure ...). Bref pour détecter un épitope conformationnel il faut conserver la structure tertiaire ou quaternaire de la protéine. Pour les mettre en évidence on aura donc besoin d'utiliser des techniques non dénaturantes (donc pas de SDS-PAGE par exemple). De l'autre coté, pour les épitopes séquentiels, tout ce qui est reconnu c'est la succession d'acides aminés, on a donc juste besoin de la structure primaire de la protéine. On peut donc utiliser des techniques dénaturantes ou non dénaturantes, au choix ! J'espère avoir répondu à ta question ! La tutobise loveyouth 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
loveyouth Posted February 21 Share Posted February 21 il y a 11 minutes, Vector a dit : Heey @loveyouth ! Pour pouvoir identifier des épitopes conformationnels, il faut que les protéines soient dans leur conformation native (avec les différentes sous-unités, les ponts disulfure ...). Bref pour détecter un épitope conformationnel il faut conserver la structure tertiaire ou quaternaire de la protéine. Pour les mettre en évidence on aura donc besoin d'utiliser des techniques non dénaturantes (donc pas de SDS-PAGE par exemple). De l'autre coté, pour les épitopes séquentiels, tout ce qui est reconnu c'est la succession d'acides aminés, on a donc juste besoin de la structure primaire de la protéine. On peut donc utiliser des techniques dénaturantes ou non dénaturantes, au choix ! J'espère avoir répondu à ta question ! La tutobise Ok je vois mieux merci ! Mais du coup dans certains Qcm de fois ils demandent si avec telle ou telle technique est-il possible de voir qqc. Du coup j’imagine que par westerne blot on pourrait voir que du séquentiel. Mais avec du dot blot ou Elisa spot je pourrais voir quelle type (je sais pas si je suis très claire dsl!) merci d’avance ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur Solution Vector Posted February 21 Tuteur Solution Share Posted February 21 (edited) En effet pour réaliser un western blot on fait au préalable un SDS-PAGE (milieu dénaturant) puis un transfert sur membrane, on observe donc que les épitopes séquentiels. Pareil pour l'immuno-blot, on utilise un milieu dénaturant. Pour ce qui est du dot-blot, les protéines ne sont pas séparées selon leur poids moléculaire (pas de SDS-PAGE), c'est une technique non dénaturante, on pourra donc observer des épitopes séquentiels et conformationnels. Pout tout ce qui est ELISA (ELISA sandwich, ELISPOT, ELISA indirecte), on utilise une réaction immunoenzymologique qui repose uniquement sur l'interaction antigène-anticorps suivie d'une réaction enzymatique. C'est donc une technique non dénaturante, on pourra donc observer des épitopes séquentiels et conformationnels. En plus de ça il faut rester vigilant aux données de l'énoncé, parfois il est précisé si le milieu est dénaturant ou non. Est-ce que c'est plus clair ? Edited February 21 by Vector Lulu_le_Fou and loveyouth 1 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
loveyouth Posted February 21 Share Posted February 21 Il y a 9 heures, Vector a dit : En effet pour réaliser un western blot on fait au préalable un SDS-PAGE (milieu dénaturant) puis un transfert sur membrane, on observe donc que les épitopes séquentiels. Pareil pour l'immuno-blot, on utilise un milieu dénaturant. Pour ce qui est du dot-blot, les protéines ne sont pas séparées selon leur poids moléculaire (pas de SDS-PAGE), c'est une technique non dénaturante, on pourra donc observer des épitopes séquentiels et conformationnels. Pout tout ce qui est ELISA (ELISA sandwich, ELISPOT, ELISA indirecte), on utilise une réaction immunoenzymologique qui repose uniquement sur l'interaction antigène-anticorps suivie d'une réaction enzymatique. C'est donc une technique non dénaturante, on pourra donc observer des épitopes séquentiels et conformationnels. En plus de ça il faut rester vigilant aux données de l'énoncé, parfois il est précisé si le milieu est dénaturant ou non. Est-ce que c'est plus clair ? C’est exactement ce que je voulais savoir merci bcp chef! Vector 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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