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SDS et western blot


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  • Tuteur

coucou, j'ai un peu de mal à voir comment interpréter ce genre de qcm...

je vois pas trop la différence entre western blot et sds page.

 

quelqu'un pourrait m'expliquer pourquoi seules les réponses ACE sont elles vraies ? merciii

 

https://zupimages.net/viewer.php?id=24/04/63g4.png

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  • Solution
1 hour ago, jeanne_31 said:

coucou, j'ai un peu de mal à voir comment interpréter ce genre de qcm...

je vois pas trop la différence entre western blot et sds page.

 

quelqu'un pourrait m'expliquer pourquoi seules les réponses ACE sont elles vraies ? merciii

 

https://zupimages.net/viewer.php?id=24/04/63g4.png

Pour la faire tres simple ; le western blot ne reconnait que la proteine d'interet (et donc la met en valeur) alors que le SDS page met en valeur toutes les proteines differentes. Dcp la B est fausse car on ne peut pas savoir si la fraction purifiee est totalement pure, on peut simplement savoir s'il y a ou non (ici il y a) la prot d'interet. Pour la D, tu vois bien que dans la partie eluee (colonne du milieu) il n'y a pas de trace de proteine a purifier au niveau du western blot (en bas) -> ca veut dire que la proteine d'interet n'a pas ete eluee.

 

Si tu as pas comprit qqch hesite pas

Edited by Aaronigashima
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  • Tuteur

 

Il y a 14 heures, Aaronigashima a dit :

Pour la faire tres simple ; le western blot ne reconnait que la proteine d'interet (et donc la met en valeur) alors que le SDS page met en valeur toutes les proteines differentes. Dcp la B est fausse car on ne peut pas savoir si la fraction purifiee est totalement pure, on peut simplement savoir s'il y a ou non (ici il y a) la prot d'interet. Pour la D, tu vois bien que dans la partie eluee (colonne du milieu) il n'y a pas de trace de proteine a purifier au niveau du western blot (en bas) -> ca veut dire que la proteine d'interet n'a pas ete eluee.

 

Si tu as pas comprit qqch hesite pas

okkkk   merci   :) 

ducoup avec le western blot on peu pas purifier c'est ça ? 

alors qu'avec le sds oui ? 

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10 minutes ago, jeanne_31 said:

 

okkkk   merci   :) 

ducoup avec le western blot on peu pas purifier c'est ça ? 

alors qu'avec le sds oui ? 

Avec le western blot tu peux seulement reperer ta proteine d'interet (donc tu peux partiellement purifier) mais tu n'as aucune autre information sur la composition du reste de ton echantillon

Edited by Aaronigashima
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  • Tuteur

mmm

et avec le sds ducoup ? mercii

il y a 1 minute, Aaronigashima a dit :

Avec le western blot tu peux seulement reperer ta proteine d'interet (donc tu peux purifier) mais tu n'as aucune autre information sur la composition du reste de ton echantillon

 

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Salut @jeanne_31 !


C'est ça, le WB n'est pas une méthode utilisée pour purifier des protéines, mais plutôt pour détecter et caractériser des protéines spécifiques dans un échantillon. On sépare les protéines en fonction de leur poids moléculaire, on les transfère sur une membrane, puis on les détecte à l'aide d'anticorps spécifiques. C'est donc une technique avant tout immunologique.

 

Quant à l'électrophorèse en SDS-PAGE, elle est principalement utilisée pour séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire. Cependant, je dirais que ne n'est pas une méthode de purification en soi, mais plutôt une étape d'analyse permettant de séparer les protéines présentes dans un échantillon en fonction de leur taille. Elle est souvent utilisée en combinaison avec d'autres techniques de purification des protéines. Après l'électrophorèse, si tu as une bande correspondant à la protéine d'intérêt, tu peux exciser cette bande de gel, extraire la protéine, puis la purifier davantage à l'aide de méthodes spécifiques telles que la chromatographie.

 

Ainsi, les méthodes de purification des protéines sont plutôt des techniques telles que la chromatographie d'affinité, la chromatographie échangeuse d'ions, la chromatographie d'exclusion, etc. Elles sont conçues pour isoler spécifiquement la protéine d'intérêt à partir d'un mélange complexe.


En espérant que cela t'aide !

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  • Tuteur
il y a 6 minutes, Névraxe a dit :

Salut @jeanne_31 !


C'est ça, le WB n'est pas une méthode utilisée pour purifier des protéines, mais plutôt pour détecter et caractériser des protéines spécifiques dans un échantillon. On sépare les protéines en fonction de leur poids moléculaire, on les transfère sur une membrane, puis on les détecte à l'aide d'anticorps spécifiques. C'est donc une technique avant tout immunologique.

 

Quant à l'électrophorèse en SDS-PAGE, elle est principalement utilisée pour séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire. Cependant, je dirais que ne n'est pas une méthode de purification en soi, mais plutôt une étape d'analyse permettant de séparer les protéines présentes dans un échantillon en fonction de leur taille. Elle est souvent utilisée en combinaison avec d'autres techniques de purification des protéines. Après l'électrophorèse, si tu as une bande correspondant à la protéine d'intérêt, tu peux exciser cette bande de gel, extraire la protéine, puis la purifier davantage à l'aide de méthodes spécifiques telles que la chromatographie.

 

Ainsi, les méthodes de purification des protéines sont plutôt des techniques telles que la chromatographie d'affinité, la chromatographie échangeuse d'ions, la chromatographie d'exclusion, etc. Elles sont conçues pour isoler spécifiquement la protéine d'intérêt à partir d'un mélange complexe.


En espérant que cela t'aide !

coucou, super merci c'est plus clair  :) 

 

et j'aurais une autre question vraiment rien à voir, mais ds une exp GST pull down, la case pull down elle correspond à quoi ? merciii

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8 minutes ago, jeanne_31 said:

coucou, super merci c'est plus clair  :) 

 

et j'aurais une autre question vraiment rien à voir, mais ds une exp GST pull down, la case pull down elle correspond à quoi ? merciii

 

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à l’instant, jeanne_31 a dit :

coucou, super merci c'est plus clair  :) 

 

et j'aurais une autre question vraiment rien à voir, mais ds une exp GST pull down, la case pull down elle correspond à quoi ? merciii

 

Dans une expérience GST-pull down, la ligne "pull down" correspond simplement à ce qui a été retenu après le pull down et donc ce qui est détectable en WB, autrement dit cela t'informe des différentes interactions protéiques. Dans le cours du Pr. Lajoie-Mazenc diapositive 57, tu vois qu'après le pull down, on retrouve la protéine MMSET en WB lorsque la bille-glutathion est étiquetée GST-BRCT (correspondant à la bille rouge), et ce d'autant plus que les cellules sont irradiées. Ainsi, MMSET interagit avec GST-BRCT dans des extraits cellulaires issus de cellules irradiées (IR). Ce n'est pas le cas avec les billes bleues (GST-FHA), donc MMSET n'interagit pas avec GST-FHA.

 

J'espère que tu as compris !

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15 minutes ago, jeanne_31 said:

coucou, super merci c'est plus clair  :) 

 

et j'aurais une autre question vraiment rien à voir, mais ds une exp GST pull down, la case pull down elle correspond à quoi ? merciii

Mais juste pour l'info te presse pas avec ca, en cours on n'a encore vu ni le WB ni le GST pull down encore (eh oui la prof est lente mais c'est comme ca)

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  • Tuteur
il y a 18 minutes, Névraxe a dit :

 

Dans une expérience GST-pull down, la ligne "pull down" correspond simplement à ce qui a été retenu après le pull down et donc ce qui est détectable en WB, autrement dit cela t'informe des différentes interactions protéiques. Dans le cours du Pr. Lajoie-Mazenc diapositive 57, tu vois qu'après le pull down, on retrouve la protéine MMSET en WB lorsque la bille-glutathion est étiquetée GST-BRCT (correspondant à la bille rouge), et ce d'autant plus que les cellules sont irradiées. Ainsi, MMSET interagit avec GST-BRCT dans des extraits cellulaires issus de cellules irradiées (IR). Ce n'est pas le cas avec les billes bleues (GST-FHA), donc MMSET n'interagit pas avec GST-FHA.

 

J'espère que tu as compris !

super merci bcp !!!

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