jeanne_31 Posted January 25 Share Posted January 25 coucou, j'ai un peu de mal à voir comment interpréter ce genre de qcm... je vois pas trop la différence entre western blot et sds page. quelqu'un pourrait m'expliquer pourquoi seules les réponses ACE sont elles vraies ? merciii https://zupimages.net/viewer.php?id=24/04/63g4.png Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Aaronigashima Posted January 25 Solution Share Posted January 25 (edited) 1 hour ago, jeanne_31 said: coucou, j'ai un peu de mal à voir comment interpréter ce genre de qcm... je vois pas trop la différence entre western blot et sds page. quelqu'un pourrait m'expliquer pourquoi seules les réponses ACE sont elles vraies ? merciii https://zupimages.net/viewer.php?id=24/04/63g4.png Pour la faire tres simple ; le western blot ne reconnait que la proteine d'interet (et donc la met en valeur) alors que le SDS page met en valeur toutes les proteines differentes. Dcp la B est fausse car on ne peut pas savoir si la fraction purifiee est totalement pure, on peut simplement savoir s'il y a ou non (ici il y a) la prot d'interet. Pour la D, tu vois bien que dans la partie eluee (colonne du milieu) il n'y a pas de trace de proteine a purifier au niveau du western blot (en bas) -> ca veut dire que la proteine d'interet n'a pas ete eluee. Si tu as pas comprit qqch hesite pas Edited January 25 by Aaronigashima orthosympathique, ness31, Névraxe and 1 other 4 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur orthosympathique Posted January 25 Tuteur Share Posted January 25 @jeanne_31 je suis d'accord avec l'explication de @Aaronigashima, si tu as besoin d'autres éléments n'hésites pas! Lulu_le_Fou and Névraxe 2 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
jeanne_31 Posted January 26 Author Share Posted January 26 Il y a 14 heures, Aaronigashima a dit : Pour la faire tres simple ; le western blot ne reconnait que la proteine d'interet (et donc la met en valeur) alors que le SDS page met en valeur toutes les proteines differentes. Dcp la B est fausse car on ne peut pas savoir si la fraction purifiee est totalement pure, on peut simplement savoir s'il y a ou non (ici il y a) la prot d'interet. Pour la D, tu vois bien que dans la partie eluee (colonne du milieu) il n'y a pas de trace de proteine a purifier au niveau du western blot (en bas) -> ca veut dire que la proteine d'interet n'a pas ete eluee. Si tu as pas comprit qqch hesite pas okkkk merci :) ducoup avec le western blot on peu pas purifier c'est ça ? alors qu'avec le sds oui ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Aaronigashima Posted January 26 Share Posted January 26 (edited) 10 minutes ago, jeanne_31 said: okkkk merci :) ducoup avec le western blot on peu pas purifier c'est ça ? alors qu'avec le sds oui ? Avec le western blot tu peux seulement reperer ta proteine d'interet (donc tu peux partiellement purifier) mais tu n'as aucune autre information sur la composition du reste de ton echantillon Edited January 26 by Aaronigashima Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
jeanne_31 Posted January 26 Author Share Posted January 26 mmm et avec le sds ducoup ? mercii il y a 1 minute, Aaronigashima a dit : Avec le western blot tu peux seulement reperer ta proteine d'interet (donc tu peux purifier) mais tu n'as aucune autre information sur la composition du reste de ton echantillon Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Aaronigashima Posted January 26 Share Posted January 26 1 minute ago, jeanne_31 said: mmm et avec le sds ducoup ? mercii Avec le SDS tu peux purifier n'importe quelle proteine de l'echantillon sans aucun probleme (tant que leur masse n'est pas trop proche non plus) Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur Névraxe Posted January 26 Tuteur Share Posted January 26 Salut @jeanne_31 ! C'est ça, le WB n'est pas une méthode utilisée pour purifier des protéines, mais plutôt pour détecter et caractériser des protéines spécifiques dans un échantillon. On sépare les protéines en fonction de leur poids moléculaire, on les transfère sur une membrane, puis on les détecte à l'aide d'anticorps spécifiques. C'est donc une technique avant tout immunologique. Quant à l'électrophorèse en SDS-PAGE, elle est principalement utilisée pour séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire. Cependant, je dirais que ne n'est pas une méthode de purification en soi, mais plutôt une étape d'analyse permettant de séparer les protéines présentes dans un échantillon en fonction de leur taille. Elle est souvent utilisée en combinaison avec d'autres techniques de purification des protéines. Après l'électrophorèse, si tu as une bande correspondant à la protéine d'intérêt, tu peux exciser cette bande de gel, extraire la protéine, puis la purifier davantage à l'aide de méthodes spécifiques telles que la chromatographie. Ainsi, les méthodes de purification des protéines sont plutôt des techniques telles que la chromatographie d'affinité, la chromatographie échangeuse d'ions, la chromatographie d'exclusion, etc. Elles sont conçues pour isoler spécifiquement la protéine d'intérêt à partir d'un mélange complexe. En espérant que cela t'aide ! Lulu_le_Fou 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
jeanne_31 Posted January 26 Author Share Posted January 26 il y a 6 minutes, Névraxe a dit : Salut @jeanne_31 ! C'est ça, le WB n'est pas une méthode utilisée pour purifier des protéines, mais plutôt pour détecter et caractériser des protéines spécifiques dans un échantillon. On sépare les protéines en fonction de leur poids moléculaire, on les transfère sur une membrane, puis on les détecte à l'aide d'anticorps spécifiques. C'est donc une technique avant tout immunologique. Quant à l'électrophorèse en SDS-PAGE, elle est principalement utilisée pour séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire. Cependant, je dirais que ne n'est pas une méthode de purification en soi, mais plutôt une étape d'analyse permettant de séparer les protéines présentes dans un échantillon en fonction de leur taille. Elle est souvent utilisée en combinaison avec d'autres techniques de purification des protéines. Après l'électrophorèse, si tu as une bande correspondant à la protéine d'intérêt, tu peux exciser cette bande de gel, extraire la protéine, puis la purifier davantage à l'aide de méthodes spécifiques telles que la chromatographie. Ainsi, les méthodes de purification des protéines sont plutôt des techniques telles que la chromatographie d'affinité, la chromatographie échangeuse d'ions, la chromatographie d'exclusion, etc. Elles sont conçues pour isoler spécifiquement la protéine d'intérêt à partir d'un mélange complexe. En espérant que cela t'aide ! coucou, super merci c'est plus clair :) et j'aurais une autre question vraiment rien à voir, mais ds une exp GST pull down, la case pull down elle correspond à quoi ? merciii Névraxe 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Aaronigashima Posted January 26 Share Posted January 26 8 minutes ago, jeanne_31 said: coucou, super merci c'est plus clair :) et j'aurais une autre question vraiment rien à voir, mais ds une exp GST pull down, la case pull down elle correspond à quoi ? merciii Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur Névraxe Posted January 26 Tuteur Share Posted January 26 à l’instant, jeanne_31 a dit : coucou, super merci c'est plus clair :) et j'aurais une autre question vraiment rien à voir, mais ds une exp GST pull down, la case pull down elle correspond à quoi ? merciii Dans une expérience GST-pull down, la ligne "pull down" correspond simplement à ce qui a été retenu après le pull down et donc ce qui est détectable en WB, autrement dit cela t'informe des différentes interactions protéiques. Dans le cours du Pr. Lajoie-Mazenc diapositive 57, tu vois qu'après le pull down, on retrouve la protéine MMSET en WB lorsque la bille-glutathion est étiquetée GST-BRCT (correspondant à la bille rouge), et ce d'autant plus que les cellules sont irradiées. Ainsi, MMSET interagit avec GST-BRCT dans des extraits cellulaires issus de cellules irradiées (IR). Ce n'est pas le cas avec les billes bleues (GST-FHA), donc MMSET n'interagit pas avec GST-FHA. J'espère que tu as compris ! Lulu_le_Fou 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Aaronigashima Posted January 26 Share Posted January 26 15 minutes ago, jeanne_31 said: coucou, super merci c'est plus clair :) et j'aurais une autre question vraiment rien à voir, mais ds une exp GST pull down, la case pull down elle correspond à quoi ? merciii Mais juste pour l'info te presse pas avec ca, en cours on n'a encore vu ni le WB ni le GST pull down encore (eh oui la prof est lente mais c'est comme ca) Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
jeanne_31 Posted January 26 Author Share Posted January 26 il y a 18 minutes, Névraxe a dit : Dans une expérience GST-pull down, la ligne "pull down" correspond simplement à ce qui a été retenu après le pull down et donc ce qui est détectable en WB, autrement dit cela t'informe des différentes interactions protéiques. Dans le cours du Pr. Lajoie-Mazenc diapositive 57, tu vois qu'après le pull down, on retrouve la protéine MMSET en WB lorsque la bille-glutathion est étiquetée GST-BRCT (correspondant à la bille rouge), et ce d'autant plus que les cellules sont irradiées. Ainsi, MMSET interagit avec GST-BRCT dans des extraits cellulaires issus de cellules irradiées (IR). Ce n'est pas le cas avec les billes bleues (GST-FHA), donc MMSET n'interagit pas avec GST-FHA. J'espère que tu as compris ! super merci bcp !!! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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