sara.bss Posted January 15 Share Posted January 15 bonjour, est ce que quelqu'un pourrai m'aider à resoudre ce qcm svp! (il vient du poly du tat 2023-2024). énoncé: Des chercheurs ont découvert une protéine, la limousine, codée par le gène dnsLMSN, qui semble à l’origine d’un processus d’enlèvement des atours corporels. Ces chercheurs souhaitent exprimer cette protéine chez la souris pour voir si la chute des poils est accélérée. Pour cela, ils fabriquent par génie génétique une cassette d’expression (ci-dessous) avec le gène d’intérêt dnsLMSN et le gène codant pour la GFP, qu’ils veulent introduire dans le plasmide plNKD (ci-dessous). Ils utilisent plusieurs enzymes de restriction (Zzz, Nnn, etc, sur le schéma ci-dessous). A. Si la cassette d’expression et le plasmide sont digérés par Nnn et Yyy, l’insertion est dite « orientée ». B. Si la cassette d’expression et le plasmide sont digérés par Nnn et Kkk, le vecteur recombinant possédera plusieurs cadres de lecture pour le gène dnsLMSN. C. Des fibroblastes de souris sont transfectés avec des vecteurs recombinants. Si ces cellules expriment la GFP, la présence du gène dnsLMSN dans leur génome est certaine. D. Ces mêmes fibroblastes expriment obligatoirement la Limousine. E. Le vecteur recombinant (digestion de la cassette et du plasmide par Nnn et Kkk) transfecté à ces mêmes fibroblastes avait une taille de 7,4 kb. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur Solution Paul.f Posted January 15 Tuteur Solution Share Posted January 15 (edited) Salut ! Je vais traiter chaque item un par un en essayant de te donner une justification précise pour que tu comprennes bien. Item A : On digère le plasmide et la cassette d'expression par deux enzymes de restriction différentes. La partie entre Nnn et Yyy est ainsi enlevée du plasmide et la cassette possède alors une extrémité Nnn et une extrémité Yyy. Il n'y a donc qu'un seul sens d'insertion possible pour la cassette qui va associer chaque extrémité à la portion correspondante du plasmide : l'extrémité Nnn avec la portion Nnn et l'extrémité Yyy avec la portion Yyy. L'insertion est dite orientée. Donc L'item A est vrai. Item B : On résonne de la même manière que pour l'item précédant. On s'aperçoit alors que le plasmide possède après difgestion une partie Nnn et une partie Kkk pouvant se lier respectivement aux extrémités Nnn et Kkk de la cassette. Ici encore l'insertion est orientée et il n'y a donc qu'un seul cadre de lecture. L'item B est donc faux. Item C : La GFP est un gène rapporteur permettant d'identifier l'expression d'un gène donné comme c'est le cas ici (gène de la GFP suivi du gène dnsLMSN placés en aval du promoteur eucaryote sur la cassette). Ainsi, si les fibroblastes transfectés expriment la GFP, ils expriment alors aussi le gène dnsLMSN et donc, ce dernier est forcément présent dans leur génome. L'item C est donc vrai. Item D : Comme expliqué à l'item précédant, l'expression de la GFP est le signe de l'expression du gène dnsLMSN et donc de la limousine, protéine codée par ce gène. L'item D est donc vrai. Item E : Pour cet item, on résonne à l'aide des données de la figure. On digère le plasmide et la cassette avec les enzymes de restrictions Nnn et Kkk. On commence par calculer la taille du fragment éliminé du plasmide suite à cette digestion soit la portion allant de Nnn à Kkk. Cette taille correspond à la somme des portions du plasmide allant de Nnn à Aaa et de Aaa à Kkk. On a alors Taille Nnn-Kkk = 300b + 1kb = 300 b + 1000b (attention aux unités !) = 1300b. On soustrait cette valeur à la taille du plasmide avant digestion pour obtenir la taile du plasmide après digestion. On obtient alors une taille de 8000-1300 = 6700b. Ensuite, on calcule la taille de la cassette qui sera insérée par le même raisonnement à partir des données. Taille de la cassette = taille Nnn-Eee + Taille Eee-Kkk = 300 + 400 = 700b. Enfin, on ajoute cette valeur à la taille du plasmide digéré pour obtenir la taille du plasmide recombinant. On a donc taille du plasmide recombinant = 6700+700 = 7400b = 7,4kb. L'item E est donc vrai. Pour récapituler, les réponses correctes sont ACDE. Voilà, j'espère que tu as compris, si tu as d'autres questions n'hésite pas. Bon courage !!! Edited January 15 by Paul.f C_trist and Lulu_le_Fou 2 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
sara.bss Posted January 15 Author Share Posted January 15 @Paul.f merci beaucoup c'est beaucoup plus clair!! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur Paul.f Posted January 15 Tuteur Share Posted January 15 Avec plaisir ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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