jeanne_31 Posted October 15, 2023 Share Posted October 15, 2023 Coucou, l'histoire d'activité constitutive et agoniste inverse est un peu floue et j'arrive pas trop à l'appliquer avec le système BRET... Est ce qu'une protéine qui a une activité constitutive ça veut bien dire qu'elle est déjà précouplée au récepteur ? Est-ce qu'il y a alors dissociation de la sous unité alpha des sous unités béta et gamma ? Un agoniste inverse découple la protéine G de son récepteur alors ? Les sous unités alpha, béta et gamma sont elles accrochées ? merci beaucoup !!! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur Solution julienn Posted October 15, 2023 Tuteur Solution Share Posted October 15, 2023 il y a 9 minutes, jeanne_31 a dit : Coucou, l'histoire d'activité constitutive et agoniste inverse est un peu floue et j'arrive pas trop à l'appliquer avec le système BRET... Est ce qu'une protéine qui a une activité constitutive ça veut bien dire qu'elle est déjà précouplée au récepteur ? Est-ce qu'il y a alors dissociation de la sous unité alpha des sous unités béta et gamma ? Un agoniste inverse découple la protéine G de son récepteur alors ? Les sous unités alpha, béta et gamma sont elles accrochées ? merci beaucoup !!! Bonjour, On parle d'activité constitutive si le récepteurs est précouplé à la protG (il y a d'autres systèmes que tu verras plus tard), l'utilisation d'un agoniste inverse découple la protG du RCPG donc il y a une dissociation complète des sous unités alpha, beta et gamma du RCPG. ( les sous unités alpha, beta et gamma restent accrochés entre elles il me semble mais je n'ai pas vu ce genre de détails en PASS). En ce qui concerne le système BRET: exemple d'un agoniste avec le système bret; rénilla luciférase (donneur d'énergie) est présente sur la sous unité alpha, le GFP est présent sur la sous unité gamma, on fixe une molécule sur le récepteur et on observe une diminution du signal bret (plus la rénilla luciférase et le GFP sont proches plus le signal est fort), donc un éloignement des sous unités alpha et gamma, ce qui représente l'activation de la protéine G, il s'agit d'un agoniste entier ou partiel. En revanche un agoniste inverse: on fixe rénilla luciférase sur la sous unité alpha de la protéine G, on fixe le GFP sur le RCPG, ici après fixation de l'agoniste inverse il va y avoir une diminution du signal BRET, ce qui correspond à l'éloignement de la protéine G et du RCPG, c'est le phénomène de découplage. (on retrouve souvent une activité constitutive avec précouplage protéine G et récepteurs dans les récepteurs opiacés) J'espère avoir répondu à tes questions, bonne journée. , melissa.sadaoui 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
jeanne_31 Posted October 15, 2023 Author Share Posted October 15, 2023 Merci beaucoup c'est très clair :) Tu pourrais me donner ton avis sur un item ? En gros la rénilla luciferase est présente sur alpha et GFP sur gamma. On me demande : "Si Y induit une augmentation du signal BRET, on peut affirmer qu'il s'agit d'un agoniste inverse". Et c'est marqué vrai. Pour moi y'aurait pas de changement d'intensité de signal non ? merci merciiii Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur julienn Posted October 15, 2023 Tuteur Share Posted October 15, 2023 il y a 5 minutes, jeanne_31 a dit : Merci beaucoup c'est très clair :) Tu pourrais me donner ton avis sur un item ? En gros la rénilla luciferase est présente sur alpha et GFP sur gamma. On me demande : "Si Y induit une augmentation du signal BRET, on peut affirmer qu'il s'agit d'un agoniste inverse". Et c'est marqué vrai. Pour moi y'aurait pas de changement d'intensité de signal non ? merci merciiii Selon moi c'est vrai (on est sûrement dans le cas d'un récepteurs qui n'est pas précouplé), un agoniste entier entraînerai une diminution du signal par éloignement des deux sous unités, et l'agoniste inverse une augmentation du signal par rapprochement des deux unités. C'est vrai que c'est ambiguë car on ne connaît pas la situation initiale du récepteur, en revanche si on compare le signal obtenu par un agoniste entier et un agoniste inverse on peut effectivement dire que avec l'agoniste inverse il y a une augmentation du signal BRET par rapport à un agoniste entier. Si tu as d'autres questions n'hésite pas ;) Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur Tétrodotoxine Posted October 15, 2023 Tuteur Share Posted October 15, 2023 Salut @jeanne_31 Je suis 100% d'accord avec l'explication de @julienn mais je voulais juste rajouter que si dans ce cadre on avait eu aucun changement d'intensité du signal, cela aurait signifié qu'on était dans le cadre d'un antagoniste (ou antagoniste neutre) qui ne possède en lui-même aucune activité mais qui empêche simplement la fixation du ligand sur son récepteur et donc l'activation de celui-ci. Cela prouve qu'on est bien sur un agoniste inverse qui a une activité opposée à celle de l'agoniste. julienn 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
jeanne_31 Posted October 15, 2023 Author Share Posted October 15, 2023 Mmmm d'accord je comprends :) merciiii Si t'es motivé j'ai encore une question (désolée je suis chiante) :) Ya un autre item qui m'ennuie Comme tout à l'heure la rénilla luciferase est présente sur alpha et GFP sur gamma. On me demande cette fois : "Si le signal BRET mesuré en l'absence du récepteur est plus fort que celui mesuré en présence du récepteur mu opioide, on peut en conclure que le RCPG est doté d'une activité constitutive." Et c'est compté vrai. Alors que pour moi ça changerait pas vu que les sous unités restent collées... merci encore :) il y a 7 minutes, Tétrodotoxine a dit : Salut @jeanne_31 Je suis 100% d'accord avec l'explication de @julienn mais je voulais juste rajouter que si dans ce cadre on avait eu aucun changement d'intensité du signal, cela aurait signifié qu'on était dans le cadre d'un antagoniste (ou antagoniste neutre) qui ne possède en lui-même aucune activité mais qui empêche simplement la fixation du ligand sur son récepteur et donc l'activation de celui-ci. Cela prouve qu'on est bien sur un agoniste inverse qui a une activité opposée à celle de l'agoniste. D'accord je comprends mieux le mécanisme... merciiii Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur julienn Posted October 15, 2023 Tuteur Share Posted October 15, 2023 il y a 7 minutes, jeanne_31 a dit : Mmmm d'accord je comprends :) merciiii Si t'es motivé j'ai encore une question (désolée je suis chiante) :) Ya un autre item qui m'ennuie Comme tout à l'heure la rénilla luciferase est présente sur alpha et GFP sur gamma. On me demande cette fois : "Si le signal BRET mesuré en l'absence du récepteur est plus fort que celui mesuré en présence du récepteur mu opioide, on peut en conclure que le RCPG est doté d'une activité constitutive." Et c'est compté vrai. Alors que pour moi ça changerait pas vu que les sous unités restent collées... merci encore :) Un récepteur constitutif est constamment lié à sa protéine G, afin que la protéine G puisse transmettre l'information via la sous unité alpha, il faut que la sous unité alpha soit découplé des sous unités beta et gamma. Donc dans le cas d'un récepteur constitutif avec cette configuration BRET, l'absence du récepteur entraîne une augmentation du signal BRET car il n'y a pas d'activité (alpha, beta gamma sont tous ensemble), en revanche si le récepteur est présent il y a donc une activité constitutive, ainsi il faut que la sous unité alpha soit découplé de beta et gamma pour permettre de transduire le signal, alors il y a une diminution du signal BRET. Le système BRET et son utilisation a été pour moi en PASS un sacré bourbier à comprendre, mais tu verras que en faisant un max de qcms tu comprendras les mécanismes, il s'agit de se modéliser le RCPG et la protéine G. Tétrodotoxine 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
jeanne_31 Posted October 15, 2023 Author Share Posted October 15, 2023 Oki, j'avais pas compris qu'il y avait dissociation de la sous unité alpha pour lorsque le récepteur a une activité constitutive. Super merci beaucoup beaucoup !!! julienn 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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