PCR

[emmaladie]

Bonjour, je ne comprends pas comment lire ce "graphique" et ducoup je comprends pas vraiement le qcm. Les items B C D E sont compté vrai. Si quelqu'un peut m'aider :) (qcm poly du tat 2023-2024)

[Sérotonine]

Salut! 

 

Je vais essayer de t'expliquer comment analyser ce résultat d'électrophorèse. 

D'abord, je te conseille de faire un petit schéma au brouillon, où tu représente l'exon 4 par une "boîte" de 250 pb, et tu représente un trait qui coupe cette boite correspondant à l'information de l'énoncé "une mutation ponctuelle dans cet exon introduit un site pour l'enzyme HindIII". 

 

Il faut savoir qu'une enzyme de restriction coupe l'adn au niveau de son site de restriction : comme l'énoncé précise au début qu'il n'y a pas de site pour l'endonucléase HindIII, tu sais que si l'enzyme HindIII coupe l'exon 4, c'est forcément au niveau du site de restriction qui a été créé par la mutation. Maintenant, pour savoir si HindIII a coupé ou pas, tu le vois sur le schéma : si tu observe une bande à 250 pb, taille de l'exon 4, tu en déduis que HindIII n'a pas coupé, car sinon le morceau aurait été plus petit. Si tu observe une bande à 100 et une à 150 (100+150=250pb), alors tu sais que il y a un site de restriction qui s'est formé dans l'exon 4, qui correspond à la mutation.

 

Se rajoute à ca le fait que chez les eucaryotes, tu as 2 allèles pour chaque gène : les 2 peuvent ne pas être muté, 1 seul peut l'être, ou les 2 peuvent l'être.

Donc, dans la piste 1, si tu observe une bande à 250pb, tu peux en déduire que 1 allèle possède l'exon 4 de taille normal, donc non muté. Mais, la présence de bandes à 100 et 150 t'indique que l'autre allèle possède le site de coupure pour HindIII et donc la mutation : par conséquent, A est faux et B est vrai.

 

Pour la piste 2, l'unique bande à 250pb te fait dire que les 2 allèles ont l'exon  4 entier, donc aucun ne porte la mutation (normalement, le trait aurait du être un peu plus épais pour montrer justement qu'il y a les 2 allèles et pas que 1, mais c'est un détail). L'item C est vrai

 

Pour la piste 3, c'est le raisonnement à l'envers de la piste 2 : la présence de 2 traits à 100 et 150 pb, et surtout l'absence de bande à 250pb te fait conclure que les 2 allèles possèdent la mutation sur l'exon 4. L'item D est vrai

 

Pour l'item E, j'ai un léger doute mais je pense que ce que signifie l'item, c'est que dans chaque cas, l'exon 4 fait bien au final 250 pb, peut importe qu'il est le site de restriction ou pas : à chaque fois tu retombe sur 250, soit directement en le lisant sur le graphique, soit en faisant la somme 100 + 150 pb.

 

Je laisse d'autres personnes compléter si besoin

 

En espérant que ce soit plus clair pour toi :) 

 

 

 

[Cassolnousmanque2]

Coucou @emaalyr, 

La notion de site de restriction est encore très floue pour vous et c’est normal parce que vous ne l’avez pas encore vraiment vue

Déjà pour reprendre les bases, une enzyme de restriction c’est une endonucléase qui va couper au milieu d’une séquence (par opposition aux exonucléases qui coupent aux extrémités)

 

Donc Hind III est un type d’endonucléase. Quand elle va reconnaître une succession précise de nucléotides qui forme un site de restriction (pour Hind III c’est (bien sur tu n’as pas la séquence à apprendre) :

5’ A-AGCTT 3’

3’ TTCGA-A 5’

alors elle va couper les brins d’ADN entre le premier et le deuxième A sur le brin du haut, et entre le premier et le deuxième A du brin du bas -> donc elle ne coupe pas droit mais tout ça tu l’apprendras plus en détail au S2 dans l’UE « Recherche »)

 

Pour l’explication des items A, B, C, D qui t’a été donnée par @Sérotonine je n’ai pas grand chose à rajouter 

Concernant l’item E, il faut que tu vérifies que dans chaque cas tu as un exon de 250 pb (donc soit directement 250, soit 100+150 = 250). En gros si tu avais eu par exemple une bande à 100 pb et une autre à 50 pb, alors là l’item aurait été faux !

 

J’espère que tu comprends un peu mieux maintenant

C’est normal que ça soit encore flou pour le moment parce que c’est un qcm qui sera surtout au programme du S2 

 

Passe une bonne journée et n’hésite pas i tu as besoin d’autres explications