theclaverie Posted March 12, 2016 Share Posted March 12, 2016 Bonjour, je n'ai pas très bien compris comment se déroule la transgénèse par recombinaison homologue. Comment fait on pour que l'integration de notre construction génique soit spécifique et non pas aléatoire comme lors de la transgénèse classique? Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Laetitiar Posted March 21, 2016 Solution Share Posted March 21, 2016 Salut ! Alors, pour la transgénèse par recombinaison homologue, on va vouloir remplacer un gène par un autre (si c'est par un qui ne code pour rien, on parle de Knock out) Pour ce faire, on va introduire notre ADN dans un blastocyste (où les cellules seront encore pluripotentes). Mais il faut enlever le gène présent dans la cellule, il va donc y avoir une coupure exactement sur le gène d'intérêt (à enlever) afin permettre la recombinaison grâce aux doigts de zinc, autrement dit l'insertion de notre ADN à la place exacte. Dans la transgénèse classique ou additive, on ne remplace pas les gènes, on se contente d'en rajouter de nouveaux, qui se positionnent donc dans l'ADN présent de façon plutôt aléatoire. J'espère que c'est plus clair, et que cela répond à ta question ! Link to comment Share on other sites More sharing options...
theclaverie Posted March 26, 2016 Author Share Posted March 26, 2016 Alors deja merci beaucoup c'est deja plus clair pour les deux techniques. Mais ma question etait plutot comment fait on, justement, pour que cela soit spécifique? Comment parmis les 30 000 gènes que nous possédons, fait-on pour cibler LE gène qui nous intérrèsse? Link to comment Share on other sites More sharing options...
david12 Posted March 29, 2016 Share Posted March 29, 2016 Salut, Je pense que ça c'est plutôt de l'ordre de la culture générale et qu'on te posera pas la question comme ça. Même si ça n'a pas été très développé par la prof, j'imagine que le ciblage se fait par reconnaissance de séquences complémentaires. Comme quand on utilise des sondes. Sauf que là, les sondes sont couplées à des systèmes enzymatiques (endonucleases...) permettant de couper l'ADN au point voulu. On peut le faire grâce à CRISPER Cas9 par exemple. Une fois qu'on a un trou a la place du gène cible, on introduit la nouvelle séquence avec une homologie de séquence aux extrémités et la recombinaison homologue fait son travail. On a donc pu remplacer un gêne unique en ciblant l'ADN avec des guides de découpe à ARN. J'espère que c'est plus clair pour toi ! Bon courage ! Link to comment Share on other sites More sharing options...
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