formation recherche 2023

[khaled]

bonjour

je ne sais pas comment répondre à ce genre de QCMs avec tels items

pour la A et la B c'est bon, juste je galère avec C, D et E

quelqu'un pourrait m'aider

 

merci d'avance

[Cassolnousmanque2]

Re coucou @khaled, 

je vois des plasmides, j’accours ;)

 

C) Si tu as une insertion du promoteur procaryote, alors après coupure par HindIII tu auras un fragment de 800 pb (correspond à la taille de l’insert (3100-2300 = 800)) + tu auras un deuxième fragment qui correspond au reste du plasmide 

Au contraire, si tu n’as pas d’insertion du promoteur procaryote, alors après coupure par HindIII, tu auras un fragment de 490 pb (correspond à la « distance en pb » entre les deux sites de restriction pour HindIII (500-10 = 490)) + tu auras un deuxième fragment qui correspond au reste du plasmide 

 

-> en fonction de l’insertion du promoteur procaryote ou non, tu vois bien que la taille des fragments que tu obtiens est différente -> donc l’item est vrai 

 

D) Comme tu réalises un clonage non orienté, tu ne peux pas déterminer le sens d’insertion de l’insert en utilisant Hind III 

Peu importe le sens, tu auras toujours un fragment de 800 pb -> donc l’item est faux 

 

E) Tu remarques que le site de restriction pour Pst1 présent sur l’insert est situé pile au milieu de cet insert 

Tu le vois par le calcul : 

3100 - 2700 = 400 pb  et 2700 - 2300 = 400 pb

Par conséquent, en utilisant cette enzyme de restriction, tu ne sauras pas dans quel sens l’insert s’est inséré dans le plasmide pCOV-PRO -> donc l’item est faux 

 

 

Révélation

Par contre je viens de voir un détail qui n’est pas cohérent dans l’énoncé… Sur le plasmide pPROM qui fait 3200 pb, on a un site de restriction à 4600 pb pour BamH1, ce qui n’est pas possible ;))

 

[khaled]

17 minutes ago, Cassolnousmanque2 said:

-> en fonction de l’insertion du promoteur procaryote ou non, tu vois bien que la taille des fragments que tu obtiens est différente -> donc l’item est vrai 

Si la taille des fragments était la même on ne pourrait pas savoir quel plasmide contient le promoteur procaryote?

 

22 minutes ago, Cassolnousmanque2 said:

D) Comme tu réalises un clonage non orienté, tu ne peux pas déterminer le sens d’insertion de l’insert en utilisant Hind III 

Peu importe le sens, tu auras toujours un fragment de 800 pb -> donc l’item est faux 

 ah d'accord donc en fait tout simplement c'est juste parce qu'on 2 mêmes enzymes, le clonage sera non orienté, donc on ne peut pas déduire le sens d'insert, en revanche si on avait 2 enzymes différents, dans ce cas là on qu'un sens d'insertion? (confirme moi)

 

26 minutes ago, Cassolnousmanque2 said:

E) Tu remarques que le site de restriction pour Pst1 présent sur l’insert est situé pile au milieu de cet insert 

Tu le vois par le calcul : 

3100 - 2700 = 400 pb  et 2700 - 2300 = 400 pb

Par conséquent, en utilisant cette enzyme de restriction, tu ne sauras pas dans quel sens l’insert s’est inséré dans  le plasmide pCOV-PRO -> donc l’item est faux 

incroyable l'explication, j'étais carrément perdu pour cet item 

je t'en remercie vraiment

[Cassolnousmanque2]

il y a 12 minutes, khaled a dit :

Si la taille des fragments était la même on ne pourrait pas savoir quel plasmide contient le promoteur procaryote?

Effectivement ! 

 

il y a 13 minutes, khaled a dit :

(confirme moi)

Yes je confirme 

 

Bon courage pour la suite !