immuno lot pour cartographier

[Midwiflower]

Saluuut, je n’ai pas très bien compris le concept de cartographie d’un épitope B par immuno blog :/ est-ce que quelqu’un pourrait m’expliquer s’il vous plaît ? merciii d’avance!!

[Cassolnousmanque2]

Coucou @newPASS_31, t’aurais un exemple de qcm sur lequel je peux m’appuyer ou je te réexplique la notion générale de l’immuno blot ? 

[Midwiflower]

C’est pas un qcm mais c un exemple du cours, je te l’envoie de suiteeee!

https://zupimages.net/viewer.php?id=23/06/qhx5.jpeg ça c ‘est le schémas qui l’illustre mais je n’ai pas vraiment compris le concept.

Edited February 10, 2023 by newPASS_31

[Cassolnousmanque2]

@newPASS_31Alors pour le Dotblot, tu déposes directement ton extrait sur une membrane de nitrocellulose sans avoir séparé au préalable les protéines puis tu ajoutes des anticorps primaires qui vont seulement te permettre de savoir si la protéine d’intérêt est présente ou non 

 

Pour l’immunoblot, tu déposes tes protéines sur un support et tu réalises une immunodétection par marquage indirect avec des Ac secondaires marqués pas une enzyme (la péroxydase par exemple). La révélation sera proportionnelle à la quantité d’Ac mais tu ne pourras pas connaître la quantité exacte de ces anticorps 

En fonction de ce que tu obtiens à l’étape de révélation, tu pourras cartographier tes épitopes 

 

C’est mieux comme ça ? 

[Midwiflower]

Merci beaucoup @Cassolnousmanque2 tu m’a éclairci certains points mais ce que je n’ai pas compris c’est notamment l’utilisation d’une banque de peptides chevauchants et anticorps liaires. 

Edited February 10, 2023 by newPASS_31

[AAAAH]

Coucou !

Alors je sais pas si mon explication sera claire comme c'est vrai que le concept est un peu bizarre, mais de ce que j'en comprends, on va reproduire à travers cette fameuse "banque de peptides chevauchants" la séquence d'acide aminée correspondant à l'antigène que l'on désire cartographier.

Le but de la cartographie c'est de savoir avec quel "endroit" de l'antigène est ce que l'anticorps va réagir. C'est pour cela que l'on ne peut pas juste utiliser les anticorps avec des antigènes complets, car ils se lieraient juste à ces derniers sans nous donner plus d'informations. En revanche, avec la banque de peptides chevauchants, on peut en quelque sorte "isoler" des parties de l'antigène pour voir lesquelles vont réagir avec l'anticorps.

On introduit donc les anticorps dans la solution, mais cela ne nous suffit pas pour déterminer l'endroit où ils se sont fixés. Pour pallier à ça, on utilise un anticorps secondaire qui se lie aux premiers anticorps pour nous permettre de savoir avec quel fragment de la séquence d'acides aminés ils ont réagit.

 

J'espère que c'est un peu plus clair 

[Midwiflower]

Mercii à tous les deux je comprends mieux!! 

[camhile]

@Cassolnousmanque2 @AAAAH j'avais justement une question à ce sujet, car le prof sur son diapo parle du western blot du dot blot, mais ensuite il illustre par un schéma d'immuno blot... du coup j'ai pas bien compris si immuno blot = synonyme d'une de ces 2 techniques ou carrément une autre technique à part ?

 

 

 

Edited February 11, 2023 by camhile

[the_last_dandelion]

Coucou @camhile ! 

Les Dot blot (dépôt simple) et Western blot (électrophorèse puis transfert) sont des techniques de détections plus génériques si tu préfères.

Un Immunoblot utilise un Dot blot ou un Western blot pour le dépôt des protéines (avec ici, protéines = antigènes), puis il y a une étape d'immunodétection indirecte (avec un anticorp secondaire pour reconnaître l'anticorps reconnaissant l'antigène). 

Ce n'est donc pas totalement une technique à part ni un synonyme non plus  Dis-toi qu'un Immunoblot est un Dot blot/Western blot encore plus poussé et qui suit un protocole bien précis !

[camhile]

@the_last_dandelion okay je vois merci bcp! 

saurais-tu par hasard ou je peux retrouver des qcms sur ces techniques? (s'entraîner à savoir laquelle utiliser en fonction de la situation présentée) 

car j'ai cherché dans le pack de poly mais il n'y a rien ...

[the_last_dandelion]

Coucou @camhile 

Alors, j'ai feuilleté les sujets types du TAT, les QCMs supplémentaires mais rien 🥹.

Après, c'est un point de cours très spécifique, ce qui est fondamental c'est que tu comprennes la différence : tu n'auras pas à déterminer quelle technique utiliser, mais plutôt à interpréter des résultats comme avec les autres techniques d'analyse . 

[camhile]

@the_last_dandelion merci bcp bcp d'avoir pris le temps de regarder plus en détail

je vais m'entraîner avec les qcms d'analyse alors en espérant que ça devienne de plus en plus logique pour moi