Tuteur eliiise Posted February 5, 2023 Tuteur Share Posted February 5, 2023 CORRECTION: E. On ne peut pas différencier la kératine et le collagène. En effet, suite à l’action du ß-mercaptoéthanol, le collagène est dénaturé en 5 sous-unités de masses égales (homopentamère), soit 5 sous-unités de 60kDa (300/5=60). La kératine étant un monomère de 60kDa, il sera impossible de distinguer ces 2 protéines en chromatographie d’exclusion. Bonsoir, je ne suis pas sûre de comprendre la correction de l'item E. J'ai l'impression qu'on parle de deux choses différentes entre l'item et la correction Est-ce que quelqu'un pourrait m'expliquer la correction? Merciii Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Solution Cassolnousmanque2 Posted February 5, 2023 Ancien Responsable Matière Solution Share Posted February 5, 2023 Coucou @elsbzd, Le bêta mercapto éthanol (BME) va venir couper les ponts disulfure qui existent entre chaque sous unité La kératine est monomérique = elle a 1 sous unité -> le BME n'aura aucune action dessus => protéine = 60 kDa La lamine est dimérique = elle a 2 sous unités -> Après action du BME, on aura 2 sous unités de 30 kDa chacune Le collagène est homopentamérique = il a 5 sous unités -> Après action du BME, on aura 5 sous unités de 300/5 = 60 kDa chacune La ferritine est monomérique = elle a 1 sous unité -> le BME n'aura aucune action dessus => protéine = 440 kDa Maintenant le principe de la chromatographie d'exclusion c'est de séparer les protéines selon leur masse moléculaire en les faisant passer dans une colonne qui contient des billes avec des pores de différentes tailles Dans les conditions dénaturantes qu'on te donne : On peut classer les protéines par ordre décroissant de masse moléculaire : Ferritine > Collagène = Kératine > Lamine Donc la ferritine sera éluée avant le collagène, qui sera élué en même temps que la kératine, qui tous deux seront élués avant la lamine donc si on fait 3 éluats successifs on aura : Eluat 1 : Ferritine Eluat 2 : Collagène + Kératine Eluat 3 : Laminine => donc la ferritine et la laminine sont bien séparées mais pas le collagène et la kératine est-ce que tu comprends mieux la correction de l'item ? barbiedocteur, totov31, emylyyy and 1 other 3 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Tuteur eliiise Posted February 6, 2023 Author Tuteur Share Posted February 6, 2023 Il y a 21 heures, Cassolnousmanque2 a dit : Coucou @elsbzd, Le bêta mercapto éthanol (BME) va venir couper les ponts disulfure qui existent entre chaque sous unité La kératine est monomérique = elle a 1 sous unité -> le BME n'aura aucune action dessus => protéine = 60 kDa La lamine est dimérique = elle a 2 sous unités -> Après action du BME, on aura 2 sous unités de 30 kDa chacune Le collagène est homopentamérique = il a 5 sous unités -> Après action du BME, on aura 5 sous unités de 300/5 = 60 kDa chacune La ferritine est monomérique = elle a 1 sous unité -> le BME n'aura aucune action dessus => protéine = 440 kDa Maintenant le principe de la chromatographie d'exclusion c'est de séparer les protéines selon leur masse moléculaire en les faisant passer dans une colonne qui contient des billes avec des pores de différentes tailles Dans les conditions dénaturantes qu'on te donne : On peut classer les protéines par ordre décroissant de masse moléculaire : Ferritine > Collagène = Kératine > Lamine Donc la ferritine sera éluée avant le collagène, qui sera élué en même temps que la kératine, qui tous deux seront élués avant la lamine donc si on fait 3 éluats successifs on aura : Eluat 1 : Ferritine Eluat 2 : Collagène + Kératine Eluat 3 : Laminine => donc la ferritine et la laminine sont bien séparées mais pas le collagène et la kératine est-ce que tu comprends mieux la correction de l'item ? ah oui okk merci j'étais restée bloquée sur le fait qu'on puisse séparer ferritine et kératine mais du coup j'ai pas fait attention que la laminine était un dimère (et que donc on pouvait séparer la lamine du collagène) merciii barbiedocteur and Cassolnousmanque2 1 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Cassolnousmanque2 Posted February 6, 2023 Ancien Responsable Matière Share Posted February 6, 2023 Avec plaisir ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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