ConstanceT Posted February 9, 2016 Share Posted February 9, 2016 Bonjour, je ne comprend pas cette diapositive, si quelqu'un peut me l'expliquer Merci ! Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution EdouardM Posted February 9, 2016 Solution Share Posted February 9, 2016 Bonsoir Constance! Cette diapositive sert à illustrer les 2 temps d'élution de la chromatographie d'échange d'anions. Dans un premier temps, l'élution se fait avec un tampon de faible force ionique, qui permet l'établissement de liaisons ioniques entre les protéines chargées négativement et les billes de DEAE-cellulose, tandis que les protéines chargées positivement ou neutres sont éluées (c'est que l'on récupère dans les tubes bleus). Dans un second temps, on remplace le tampon par un tampon de force ionique élevée ce qui va faire céder les liaisons ioniques: les protéines chargées négativement sont alors éluées (c'est ce que l'on récupère dans les tubes rouges). Link to comment Share on other sites More sharing options...
Delph Posted February 10, 2016 Share Posted February 10, 2016 Pour compléter la réponse, je te précise l'importance du pH utilisé dans cette manipulation : -Lors de l'utilisation du tampon de faible force ionique à pH 8.5, les protéines ayant un pI (point isoélectrique) inférieur à 8.5 sont sous forme négative (anion) et s'accrochent par interactions electrostatiques à la matrice de DEAE cellulose (qui est positive). Les protéines ayant un pI>8.5 sont positives (cations), donc ne s'accrochent pas et sont éluées par le tampon. -On va garder la matrice de DEAE cellulose et les protéines de pI<8.5 qui y sont attachées pour la suite (car les protéines de pI >8.5 ont été éluées). On utilise un gradient continu de concentration (la concentration en NaCl du tampon augmente progressivement). Donc les protéines les moins négatives (pI le plus élévé parmi les protéines de pI<8.5) se détachent en premier et les plus négatives (pI le plus faible dans les protéines de pI<8.5) se détachent en dernier. Il y a donc une élution des protéines selon leur gradient de pI : du pI le plus élevé (élué en 1er) vers le pI le plus bas (élué en dernier). Voilà, j'espère que ça t'aide Link to comment Share on other sites More sharing options...
ConstanceT Posted February 14, 2016 Author Share Posted February 14, 2016 Merci ! Link to comment Share on other sites More sharing options...
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