Item

[manombilical]

Bonjour, je n’arrive pas à trouver les bonnes valeurs pour l’item D qcm 2 du concours blanc de l’an dernier en pharma , pouvez vous m’aider svp? 
Merci d’avance 

Edited January 13, 2023 by manombilical

[the_last_dandelion]

@manombilical

Avant tout je remets une photo de l'énoncé ! :

D. Après insertion du promoteur à l’aide de BamH1 et Pst1, la digestion par HindIII du plasmide pGFP permet d’obtenir 4 fragments respectivement de 110, 310, 1630 et 3800pb.

 

Alors ! 

Déjà première étape, on te dit qu'on a inséré le promoteur à l'aide de BamH1 et de Pst 1 : au niveau du plasmide PASS, entre ces deux sites (un à 800 pb et un à 1500 pb), tu as 700 pb. C'est ce bout là que tu ajoutes à pGFP. Au niveau de pGFP, il y a 50 pb (1350-1300) entre les deux sites des enzymes de restriction. Donc avec l'ajout du promoteur, pGFP fait maintenant : 5200 - 50 + 700 = 5850 paires de base.

 

Deuxième étape, on digère le plasmide obtenu par Hind III. Sur le nouveau plasmide, il y a 4 sites pour cette enzyme : 2 déjà là de base sur pGFP (un à 1200 pb et un à 2600 pb) + 2 sur le promoteur inséré (un à 810 pb et un à 1120 pb sur pPASS anciennement). La digestion permet donc d'obtenir 4 fragments : 

- (1) Entre le site originel à 1200 pb sur pGFP et le site à 800 pb sur le promoteur : sa taille se calcule telle que : entre mon site à 1200 pb et le site de BamH1 qui a permis l'insert, j'ai 100 pb. Ensuite, j'ai 10 pb entre le site de BamH1 (810) et celui de HindIII (800) sur pPASS avant insertion. Mon fragment fait 110 pb.

- (2) Entre mes deux sites présents sur le promoteur inséré : 810 et 1120 = 310 pb. 

- (3) Entre l'ancien site à 1120 pb sur pPASS et le site sur pGFP à 2600. La taille se calcule : du site à 1120 pb au site de Pst1 (1500) utilisé pour l'insertion, j'ai 380 pb. J'y ajoute le fragment entre le site de Pst1 sur pGFP et le site de HindIII à 2600 pb sur pGFP toujours, j'ai 1250 pb. En tout, ça me fait 1250 + 380 = 1630 pb. 

- (4) Il me reste le fragment constitué par le reste du nouveau plasmide pGFP, c'est-à-dire : 5850 - (110 + 310 + 1630) = 3800 pb. 

 

Voilà, j'espère que ça répond à ta question ! N'hésite pas à redessiner le nouveau plasmide obtenu et les découpages détaillés dans mon post !

Et je suis là si tu as d'autres questions