Ouistiti Posted January 7, 2016 Share Posted January 7, 2016 Bonsoir ! Je ne comprends pas trop le QCM 9 de 2015 ... En fait je ne vois pas trop comment agissent l'IPTG et X-Gal Et j'ai quelques incompréhensions par rapport à la transgenese et protéines recombinantes ... Je ne vois pas trop comment agit le gêne létal ni trop à quoi il sert. Est ce qu'il permet de sélectionner certaines bactéries ? Ausi,, je ne comprends pas trop comment on obtient les protéines de fusion (c'est plutôt leur production que je ne comprends pas, la purification ça va ^^) Et je ne comprends pas trop non plus ce qu'est un operon inductible ... Désolée pour toutes ces questions mais je suis un peu (un énorme peu !) perdue sur cette dernière partie du cours ! ^^ Quelqu'un pourrait il m'expliquer ? Merci beaucoup ! Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sarouech Posted January 7, 2016 Share Posted January 7, 2016 Je t'explique les quelques truc que je sais, après je te conseille d'attendre la confirmation d'un tuteur Utilisation du gène létal Diapo 209 et 211 Si t'as digestion par les enzymes de restriction c'est bien produit le gène létal disparaît et la région que tu souhaite intégrer à ton vecteur a pris sa place. Mais si ta digestion ne s'est pas bien produit le gène létal persiste et qui dis létal tue. En gros ton gène létal permet de sélectionner les vecteur avec la région codante que tu souhaite exprimer à ta cellule hôte Protéine de fusion Diapo 215 Tu vas faire exprimer à ton plasmide l'opéron lactose avec le gène lac Z . Le gène lac Z qui va coder pour la Beta galactosidase. Mais si ton insertion de gène s'est bien passé. Ta région codante, que tu souhaite exprimer à ta cellule hôte, va s'intégrer entre le gène lac Z. Et quand il va avoir traduction. On va traduire une Partie du gène lac z et la région codante. Et tu as une protéine de fusion (2 région différente qui ont fusionné). Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien du Bureau Solution Alexx Posted January 8, 2016 Ancien du Bureau Solution Share Posted January 8, 2016 Bonjour ! (Je te fais là un copié/collé d'un sujet auquel je viens de répondre qui portait sur le même qcm, dis moi si t'as besoin de plus d'infos) Le plasmide n'est pas fonctionnel en absence de lactose : donc il faut du lactose. MAIS le lactose est dégradé par la béta-galactosidase donc on utilise l'IPTG (analogue du lactose) pour que le plasmide fonctionne.En présence de X-Gal (clivé par la béta-galactosidase) les colonies seront colorées bleues. Pour le gène létal et la protéine de fusion Sarouech a bien expliqué En ce qui concerne l'opéron inductible : Il s'agit donc d'une séquence d'ADN organisée de telle façon qu'en amont du promoteur d'un gène PROCARYOTE (on a fait pleins de pièges dans les qcm des colles et du poly de Noël sur ça ! Les opérons c'est que chez les procaryotes) se trouve un autre gène capable de produire un répresseur de ce même promoteur ! Cela en conditions normales ! En présence de lactose (par exemple), le répresseur ne se lie plus au promoteur et donc la séquence codante en aval pourra être traduite ! Il y aura dans le cas du lactose traduction de l'ARN de la béta-galactosidase qui va dégrader le lactose. Ainsi une fois que le lactose n'est plus présent, le répresseur se relie à l'opérateur et la béta-gal n'est plus exprimée. En fait, on traduit une protéine que quand on en a besoin grâce à ce système Voilà voilà ! Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ouistiti Posted January 8, 2016 Author Share Posted January 8, 2016 Hello ! Merci pour ta réponse En ce qui concerne l'IPTG, en fait je vois pas trop à quoi ça sert ... J'ai compris le principe de remplacer le lactose pour pas qu'il soit coupé mais je vois pas comment agit X-Gal :/ ça veut dire que quand le gêne est bien inséré dans le plasmide, X-Gal n'a plus d'action ? J'ai compris pour le gêne létal merci à vous deux ! Et par rapport à l'opéron inductible, je crois que j'avais pas compris comment s'arrête la traduction ... C'est le codon stop du gêne ou il y en a un pour l'opéron ? Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien du Bureau Alexx Posted January 10, 2016 Ancien du Bureau Share Posted January 10, 2016 Alors, L'IPTG n'est pas clivé par la béta-gal c'est pour ça qu'il est utilisé, s'il était clivé (comme le lactose) l'opéron ne fonctionnerait pas non plus ! X-Gal n'a pas d'action, c'est lui qui subit l'action ! Une fois clivé par béta gal, la molécule devient bleue. Si le gène est bien inséré la séquence de béta gal est rompue (puisque le gène s'insère au milieu) du coup X-Gal n'est pas clivé et la colonie est blanche ! Et pour l'opéron c'est le codon stop du gène qui arrête la traduction Est-ce plus clair ? Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ouistiti Posted January 10, 2016 Author Share Posted January 10, 2016 Oui j'ai enfin compris ! merci beaucoup !!! Link to comment Share on other sites More sharing options...
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