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RFLP


Cantonaise
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  • Solution

On cherche à montrer la présence d'une mutation, pour cela on s'aide d'une enzyme de restriction, ici pst1. On fixe des amorces et on amplifie, à l'aide d'une PCR, la séquence qui nous intéresse. Chez un sujet présentant un allèle non muté, l'enzyme va "digérer" la séquence d'ADN en deux morceaux. On le remarque au niveau de la PCR par l'apparition de deux bandes. Lors d'une mutation au niveau de cette séquence, il y a disparition du point de restriction et donc pas de reconnaissance par l'enzyme. 

Dans ton exercice, on te montre la séquence reconnu par l'enzyme et les points de coupure (signalés par une flèche). La PCR te montre les résultats du contrôle (normal) et des patients avec ou sans action de pst1. 

  • Normal : il est homozygote non muté (pour cette mutation), car après l'action de pst1 on voit deux bandes de poids moléculaires inférieurs à celle présente sans action de pst1.
  • Patient 1 : il présente deux allèles mutés car il n'y a pas d'action de pst1.
  • Patient 2 : Il est hétérozygote pour cette mutation, car après action de pst1 on remarque trois bandes. La première correspond au fragment d'ADN muté et donc non digéré. Les deux autres bandes correspondent au fragment d'ADN non muté, sensible à pst1.
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