zfzfz Posted March 17, 2022 Share Posted March 17, 2022 https://tutoweb.org/PDFs/Librairie/PASS/Concours Blanc/S2/Sujets/Pharmacie 2021-2022.pdf Et quelque ca signifie quand on dit digestion par merci Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution phényléanine Posted March 17, 2022 Solution Share Posted March 17, 2022 Salut !! Dans l'énoncé on te dit que l'on veut isoler le promoteur eucaryote tissus spécifique, qui est représenté par la flèche épaisse sur le plasmide. Pour pouvoir l'isolé il faut donc couper le plasmide grâce à des sites de restrictions (hindIII, xho1, ...). Donc ici il faut choisir les bons sites de restriction pour couper avant et juste après la flèche épaisse ( donc le promoteur) . Une fois que tu as ton promoteur isolé il faut venir l'insérer dans le plasmide pGFP. Tu dois donc couper aussi le plasmide pGFP, mais attention , il ne faut pas couper ce plasmide là où il y a l'ADNc codant la GFP (puisque tu veux justement exprimé la GFP. Ensuite il faut utiliser des sites de restrictions que tu retrouves dans les deux plasmides : ici les deux plasmides ont en commun hindIII, BamH1 et Pts1. On revient au plasmide p PASS : pour isoler ton promoteur tu n'as pas trop le choix, il te faudra utilisé BamH1 et Pts1, car si tu utilises Hind III tu vas couper ton promoteur en plein milieu de sa séquence. Aussi tu utilises deux amorces pour bien isoler uniquement le promoteur (le reste du premier plasmide on s'en fiche ) Ensuite le deuxième plasmide pGFP, tu ne peux pas coupé par Hind III car sinon tu vas perdre l'ADNc de la GFP (donc tu perds l'intérêt de la manipulation) . Il ne te reste plus qu'un choix : couper par les mêmes enzymes que pour le plasmide pPASS. Une fois que tu as les deux "bouts", le fragment isolé et le plasmide "coupé" tu peux assembler les deux : je t'ai fait un schéma pour que ce soit plus clair. ! En digérant avec Bamh1 et PTs1 tu perds 50 pb dans ton plasmide pGFP !! une fois que tu as ton plasmide recombiné, tu peux venir "digérer" celui ci avec n'importe quelle enzyme présente sur le plasmide. Ici on dit digérer mais on peut aussi dire couper si tu préfères. Cela permet d'avoir un ou plusieurs fragments et cela nous permet de vérifier que le promoteur s'est insérer dans le bon sens. En effet on va mesurer le poids des différents fragments obtenus et vérifier donc la validité de la recombinaison J'espère que c'est plus clair pour toi! n'hésites pas si tu as des questions !! Manuscrit-2022-03-17-172422.pdf Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Kakarotto2003 Posted May 15, 2022 Share Posted May 15, 2022 D'ACCORD merci @phényléaninedesole pour les remerciement si tardif et pourrait tu m'expliquer comment il trouve la question d pck je trouve ps les meme fragment du tout je comprrend pas la méthode merci Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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