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Dosage type ELISA


iamroro
Go to solution Solved by Pitchounou,

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  • Ancien Responsable Matière

Salut,

Alors si j'ai bien compris, la protéine est secreté donc la recupère (elle sera dans un tube avec d'autres molécules), ensuite on purifie (on essaie de prendre qu'elle), ensuite quand on a notre protéine seule on la met en contact avec un AC avec une  enzyme qui colore un substrat. Ducoup si on a la protéine alors l'AC va se lier et si on met le substrat on est censés voir un truc coloré

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  • Solution

Salut @iamroro ! 

 

La méthode ELISA c'est en gros une méthode qui te permet de doser des molécules, des antigènes. 

 

Le principe est assez simple : tu as un puit, au fond duquel tu mets ton échantillon contenant l'antigène que tu veux doser, par exemple une protéine X.

Ensuite tu mets dans ce puit des anticorps anti-protéine X qui sont couplés à une enzyme.

 

Tu laves ensuite, donc tu enlèves tous les anticorps qui ne se sont pas fixés, et tu mets le substrat de l'enzyme, réaction qui est le plus souvent colorée

Ainsi les couples antigènes-anticorps sont révélés par une coloration.

 

C'est donc assez pratique parce que tu peux doser "à l'oeil nu" par l'intensité de la couleur ta quantité de protéine.

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Si tu utilises un seul anticorps, le jaune sur l'image par exemple on parle d'ELISA direct.

Si tu utilises 2 anticorps, 1 qui reconnaît l'antigène et 1 autre qui reconnaît l'anticorps reconnaissant l'antigène (le deuxième anticorps porte l'enzyme) alors on parle d'ELISA indirect

 

C'est plus clair pour toi ? 

 

 

NB : @yeisir c'est exactement ça ! 

Edited by Pitchounou
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Hello !!

 

Il s'agit d'un test immunologique qui permet la détection ou le dosage de molécules (des protéines, Ac, Ag) dans un échantillon biologique.

Il existe 4 types de test ELISA : 

  • ELISA direct, permet de détecter ou doser des anticorps. Elle n’utilise qu’un anticorps primaire ;
  • ELISA indirect, la plus utilisée, permet aussi de détecter ou doser des anticorps. Elle utilise un anticorps secondaire qui lui permet une meilleure sensibilité que l’ELISA direct ;
  • ELISA en compétition, permet le dosage des antigènes. Réalisée par compétition de liaisons, elle n'utilise pas d'enzyme ;
  • ELISA « en sandwich », permet le dosage des antigènes. Cette technique est utilisée couramment en recherche.

En espérant t'avoir aidé :) 

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