Item D QCM3 Poly Plasmide

[mouchou]

Salut

j'ai un peu de mal à resoudu l'item D.

comment faire le calcul?

Aussi comment savoir à quel endroit on doit couper le plasmide?

personellement je pense que B est juste car je me suis basé sur la cassette mais je doute que ça soit la bonne methode.

Merci beaucoup !!

[FabienDespascito]

Saloute,

Alors déjà qu'est ce que tu veux dire par là ?

Le 16/01/2022 à 17:21, romanov a dit :

car je me suis basé sur la cassette mais je doute que ça soit la bonne methode.

 

Le 16/01/2022 à 17:21, romanov a dit :

Aussi comment savoir à quel endroit on doit couper le plasmide?

 

Alors pour ça tu dois te demander "qu'est ce que je veux dans mon plasmide et qu'est ce qu'il faut dans mon plasmide"

Ce que tu veux tu le trouve dans l'énoncé :

- La séquence codante pour le GFP

- l'ADNc de la p53 en entier !!! donc ne pas prendre des enzymes qui coupe en milieu 

Ce qu'il faut tu dois le savoir : 

- Un promoteur qui va bien avec le type cellulaire chez qui tu étudie le plasmide

- La séquence codante

- Un terminateur/un polyA, qui est ici le codon STOP TGA

- Une origine de réplication (par exemple ORI) sans lequel le plasmide ne peut pas survivre

 

Maintenant regarde les couples d'enzymes qu'on te propose : 

- HINDIII et PST1 : HindIII possède 2 site de restriction sur l'insert, et va couper de chaque côté du gène de la GFP, or on veut qu'il y ait de la GFP, donc ce couple n'est pas bon

- BamH1 et Xho1 coupe au niveau de l'insert et prend bien la séquence codante pour le GFP et l'ADNc, et au niveau du plasmide receveur il ne coupe pas de promoteur ou d'autre séquence qui pourrait s'avérer importante. Donc on prends ce couple

 

Le 16/01/2022 à 17:21, romanov a dit :

comment faire le calcul?

 

Alors maintenant qu'on sait quelle sont les enzymes qu'on utilise on va pouvoir faire cet item.

En premier tu coupe au niveau de tout les sites de restrictions et tu regarde les fragments que tu as : 

Au niveau du plasmide : 

- 1 fragment de 50pb qui correspond au pb entre BamH1 et Xho1

- 1 fragment de 6150 pb qui correspond au plasmide dans lequel on a perdu le fragment de 50pb

Au niveau de l'insert :

- 1 fragment de 630 pb (1300 - 670)

 

Maintenant place au calcul : 

On élimine le fragment de 50pb car il ne présente pas d'ORI, donc on ne va pas intégrer l'insert à cette partie, car l'ORI il le faut

Donc il nous reste le fragment de 6150pb + l'insert de 630pb = 6780pb

Donc l'item D est Vrai

 

En espérant t'avoir aidé, n'hésite pas si tu as d'autres questions :)