Fiche astuce : bon sens-mauvais sens calcul

[chlorure]

Bonjour ! Je ne comprends pas comment trouver les chiffres de bon sens et mauvais sens : je ferais x - (y+z) mais je ne sais pas quoi prendre. Je ne comprends pas non plus pourquoi on prend toujours 800 et 5200 pour BAMH1 qu'il soit dans le bon sens ou mauvais sens, alors que Pst 1 change. Est-ce par rapport à l'énoncé du 3 concernant BAMH1? 

 

 

Pareil pour le QCM 2 : Comment trouver les chiffres du mauvais sens?  (celles de l'item c)

 

 

 

Merci infiniment de votre aide

Edited January 8, 2022 by PASSnoncodant

[Anne-Lise]

Bonsoir, 

 

Pour Bam H1 on prend toujours 800 et 5200 car BamH1 a servi à faire la digestion du premier plasmide pour ensuite intégrer le promoteur dans le deuxième. C'est à dire qu'on a coupé un segment du premier plasmide avec Bam H1 qui faisait 800pb. Donc quand on l'insère dans le deuxième plasmide qu'on le mette dans le bon sens ou non il fait toujours 800pb. Et le 5200 correspond à la taille du plasmide avant l'ajout du promoteur. 

Pst1 lui par contre change parce que ce n'est pas lui qui a servi à la digestion du premier plasmide et qu'il a un site de restriction entre les 2 sites de restriction de BamH1 utilisé pour la digestion du 1er plasmide et un autre site de restriction en dehors de ces 2 sites de restriction sur la 2ème plasmide.

Pour calculer les longueurs dans le bon sens ou dans le mauvais sens je n'ai pas trop compris ta question. Mais si on prend l'exemple de couper par Pst1 pour déterminer la taille: Tu fais 2150 - 1400 = 750 donc tu as un premier segment qui fait 750pb. Puis 6000 - 750 = 5250 Donc un deuxième segment qui fait 5250pb. Donc dans le cas général, tu fais la différence entre 2 sites adjacents de restriction de l'enzyme (parfois il faut répéter cette étape plusieurs fois si tu as plus de 2 sites de restriction) puis tu fais la différence entre la taille totale du plasmide et la taille de tous les segments que tu as calculé pour trouver la taille du dernier segment. Pour déterminer si le promoteur est dans le bon sens ou non, l'enzyme qui tu utilise pour couper le plasmide recombinant doit avoir un site de restriction entre les 2 sites de restriction de l'enzyme utilisé pour couper le premier plasmide (ici BamH1) et un autre site de restriction en dehors.

 

J'espère que j'ai été claire sinon n'hésite pas à me redemander.