poly pharma

[violettemerguez]

Salut dans le qcm 3 P 166 je ne comprends pas comment on peut savoir qu'il faut insérer la séquence d'intérêt juste après le promoteur eucaryote ? ET à la question D je ne comprend pas comment on sait qu'il faut rajouter 630 paires de bases 

Merci d'avance 

[PASSlesrep]

Pour la A je suis pas trop sur donc je te dis pas pour le moment. En revanche pour la D c'est très simple tu as la séquence contenant la GFP que l'on veut insérer dans le plasmide. Tu trouves qu'il utilise les enzymes de restrictions BamH1 et Xho1 comme tu le constate on retrouve des sites de restrictions des deux enzymes sur la séquence que l'on souhaite intégrer. Sur chaque site en dessous on t'indique leur position: une à 1300 et l'autre à 670. Si tu coupe au niveau des deux sites tu te retrouve avec une séquence de 670pb qui vient s'insérer dans le plasmide. (Donc +670) 

[SBY]

Hello @anaa ! 

Dans l'item A, on nous dit qu'on utilise les enzymes BamH1 et Xho1. Ces deux enzymes de restrictions vont être utilisées à la fois sur la séquence d'intérêt et sur le plasmide. Ici, pas de soucis on découpe bien toute la partie qui nous intéresse au niveau de la séquence d'intérêt (GFP + ATG --> TGA) et tu vois que les enzymes vont agir sur le plasmide juste après le promoteur eucaryote. Donc en gros, ce morceau du plasmide sera enlevé et remplacé par le fragment obtenu de notre séquence d'intérêt.

Petit plus : ici, on fait un clonage orienté puisqu'on utilise deux enzymes différentes. 

J'ai trouvé une vidéo pas trop mal pour t'aider à visualiser https://www.youtube.com/watch?v=5ELVqRxyUcw

 

 

Pour l'item D :

Je complète juste la réponse de @PASSlesrep 

On a trouvé qu'on utilisait les enzymes BamH1 et Xho1. Quand elles agissent sur la séquence d'intérêt, on obtient un fragment de 1300-670 = 630 pdb. 

Au niveau du plasmide, elles vont retirer un fragment de 50pdb (1400-1350). On se retrouve alors avec un plasmide qui fait 6150pdb (6200-50).

Donc après insertion du fragment d'intérêt, le plasmide recombiner aura une taille de 6150 + 630 = 6780pdb

 

Révélation

Juste les plasmides font parti de la recherche. Ici, c'est la pharmacocinétique. Du coup je t'ai déplacé le message 

 

J'espère que c'est plus clair pour toi ! 

Bonne journée 

[violettemerguez]

Le 07/01/2022 à 14:11, SBY a dit :

Hello @anaa ! 

Dans l'item A, on nous dit qu'on utilise les enzymes BamH1 et Xho1. Ces deux enzymes de restrictions vont être utilisées à la fois sur la séquence d'intérêt et sur le plasmide. Ici, pas de soucis on découpe bien toute la partie qui nous intéresse au niveau de la séquence d'intérêt (GFP + ATG --> TGA) et tu vois que les enzymes vont agir sur le plasmide juste après le promoteur eucaryote. Donc en gros, ce morceau du plasmide sera enlevé et remplacé par le fragment obtenu de notre séquence d'intérêt.

Petit plus : ici, on fait un clonage orienté puisqu'on utilise deux enzymes différentes. 

J'ai trouvé une vidéo pas trop mal pour t'aider à visualiser https://www.youtube.com/watch?v=5ELVqRxyUcw

 

 

Pour l'item D :

Je complète juste la réponse de @PASSlesrep 

On a trouvé qu'on utilisait les enzymes BamH1 et Xho1. Quand elles agissent sur la séquence d'intérêt, on obtient un fragment de 1300-670 = 630 pdb. 

Au niveau du plasmide, elles vont retirer un fragment de 50pdb (1400-1350). On se retrouve alors avec un plasmide qui fait 6150pdb (6200-50).

Donc après insertion du fragment d'intérêt, le plasmide recombiner aura une taille de 6150 + 630 = 6780pdb

 

  Révéler le contenu masqué

Juste les plasmides font parti de la recherche. Ici, c'est la pharmacocinétique. Du coup je t'ai déplacé le message 

 

J'espère que c'est plus clair pour toi ! 

Bonne journée 

Oui c'est plus clair merci beaucoup !

Le 07/01/2022 à 13:13, PASSlesrep a dit :

Pour la A je suis pas trop sur donc je te dis pas pour le moment. En revanche pour la D c'est très simple tu as la séquence contenant la GFP que l'on veut insérer dans le plasmide. Tu trouves qu'il utilise les enzymes de restrictions BamH1 et Xho1 comme tu le constate on retrouve des sites de restrictions des deux enzymes sur la séquence que l'on souhaite intégrer. Sur chaque site en dessous on t'indique leur position: une à 1300 et l'autre à 670. Si tu coupe au niveau des deux sites tu te retrouve avec une séquence de 670pb qui vient s'insérer dans le plasmide. (Donc +670) 

mercii