Helleden Posted November 3, 2015 Share Posted November 3, 2015 Bonjour ! A propos des amorces utilisées dans l'amplification par PCR, il y a un point que je ne trouve pas très clair... On nous a dit en cours que le couple d'amorce utilisé est complémentaire et antiparallèle. Pourtant, dans plusieurs QCMs, la correction compte vrai pour des amorces qui sont les mêmes que la séquence à amplifier (et donc pas complémentaires). Plus concrètement, on a la séquence suivante : 5' ATCCCCTGACATCG...//...TAGGTCATCCGAT 3' Et dans la correction, les amorces sensées être utilisées sont : 5' TGACATC 3' et 5' GGATGA 3' Pourtant on voit bien que la première amorce fait partie de la séquence à gauche... et n'est donc ni complémentaire ni antiparallèle. Alors comment ça se fait qu'on puisse l'utiliser ? Merci de m'éclairer, j'avoue être complètement perdue Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution thomas_csa Posted November 3, 2015 Solution Share Posted November 3, 2015 Salut, Alors pour ce genre d'exercice le mieux pour pas se tromper c'est de faire le brin complémentaire de la séquence qu'on veut amplifier (en général on aura toujours le brin codant) 5' ATCCCCTGACATCG...//...TAGGTCATCCGAT 3' (brin codant) 3' <<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<=(amorce) 5' 5' (amorce) =>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>3' 3' TAGGGGACTGTAGC...//... ATCCAGTAGGCTA 5' (brin matrice) Pour la PCR, y a 3 étapes : - Dénaturation des brins d'ADN (Autour de 100°C) - Hybridation des amorces (une sur chaque brin d'ADN pour obtenir à la fin 2^n cycle à la fin) - Élongation (synthèse à partir des amorces dans le sens 5'=>3' On prend le première amorce (en général elle s'hybride avec le brin matrice) 3' TAGGGGACTGTAGC...//... ATCCAGTAGGCTA 5' (brin matrice) 5' TGACATC 3' du coup c'est normal qu'elle est la même séquence que celle du brin codant comme c'est complémentaire et antiparallèle comme l'amorce Ensuite on le fait pour l'autre brin : 5' ATCCCCTGACATCG...//...TAGGTCATCCGAT 3' (brin codant) 3' AGTAGG 5' Et voila on se retrouve bien avec les amorces hybrider et on va pouvoir obtenir après élongation deux doubles brins d'ADN au premier cycle En espérant t'avoir aidé Link to comment Share on other sites More sharing options...
chloem Posted November 3, 2015 Share Posted November 3, 2015 Je confirme la réponse donnée Pour ce type d'exercice, je te conseille de réécrire le brin complémentaire. Ça permet d'éviter des erreurs. Link to comment Share on other sites More sharing options...
Helleden Posted November 4, 2015 Author Share Posted November 4, 2015 Oui, merci beaucoup c'est très clair maintenant ! Link to comment Share on other sites More sharing options...
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