Ancien Responsable Matière Couzouféroce Posted December 6, 2021 Ancien Responsable Matière Share Posted December 6, 2021 Salut! j'avais une question par rapport à l'électrophorèse. On nous oppose dans le cours l'étude "native" (poids/taille/charge sous forme repliée) ou bien dénaturée avec du SDS Page: or, on sait que le SDS page, à besoin d'un Co-facteur qui sert d'agent dissociant (B-ME, guanidine...) donc j'étale mes question: -Que se passe t'il s'il n'y a pas d'agent dissociant associé au SDS PAGE ? -Quand est-ce que l'électrophorèse peut dissocier étudier le poids moléculaire/la taille? -Comment différentier étude par électrophorèse + EIF et étude par chromatographie ? merci et désolé Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Solution nemnémo-raux Posted December 6, 2021 Ancien Responsable Matière Solution Share Posted December 6, 2021 il y a 5 minutes, Couzouféroce a dit : Que se passe t'il s'il n'y a pas d'agent dissociant associé au SDS PAGE ? Du coup ça sert à rien, car ta protéine d'intérêt ne sera pas dénaturée et restera sous forme repliée. il y a 6 minutes, Couzouféroce a dit : Quand est-ce que l'électrophorèse peut dissocier étudier le poids moléculaire/la taille? Ca, c'est sur colonne d'exclusion (pour la taille) ! Du coup, ce n'est plus une électrophorèse mais bien une chromatographie. Vous le verrez au S2 en détail Pour le poids moléculaire, il faut faire SDS PAGE. = électrophorèse il y a 9 minutes, Couzouféroce a dit : Comment différentier étude par électrophorèse + EIF et étude par chromatographie ? Une électrophorèse étudie soit les protéines à l'état naturel = repliées, dans le cas de l'iso électrofocalisation IEF, tu obtiens donc le point isoélectrique. Soit des protéines dénaturées, avec un agent comme tu l'as rappelé, et dans ce cas tu obtiens en plus du pI le poids moléculaire. = électrophorèse 2D Une électrophorèse fait migrer les protéines sous un champs électrique. Une chromatographie c'est par exemple échange d'ions sur colonne. Vous verrez le reste au S2 ! C'est des techniques plus badass, comme la colonne d'exclusion qui piège les grosses protéines. Ilonaa 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Couzouféroce Posted December 6, 2021 Author Ancien Responsable Matière Share Posted December 6, 2021 Il y a 3 heures, nemnemo-tomne a dit : Du coup ça sert à rien, car ta protéine d'intérêt ne sera pas dénaturée et restera sous forme repliée. Ca, c'est sur colonne d'exclusion (pour la taille) ! Du coup, ce n'est plus une électrophorèse mais bien une chromatographie. Vous le verrez au S2 en détail Pour le poids moléculaire, il faut faire SDS PAGE. = électrophorèse Une électrophorèse étudie soit les protéines à l'état naturel = repliées, dans le cas de l'iso électrofocalisation IEF, tu obtiens donc le point isoélectrique. Soit des protéines dénaturées, avec un agent comme tu l'as rappelé, et dans ce cas tu obtiens en plus du pI le poids moléculaire. = électrophorèse 2D Une électrophorèse fait migrer les protéines sous un champs électrique. Une chromatographie c'est par exemple échange d'ions sur colonne. Vous verrez le reste au S2 ! C'est des techniques plus badass, comme la colonne d'exclusion qui piège les grosses protéines. Encore une fois, c'est parfait ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Couzouféroce Posted December 7, 2021 Author Ancien Responsable Matière Share Posted December 7, 2021 Il y a 22 heures, nemnemo-tomne a dit : Du coup ça sert à rien, car ta protéine d'intérêt ne sera pas dénaturée et restera sous forme repliée. Ca, c'est sur colonne d'exclusion (pour la taille) ! Du coup, ce n'est plus une électrophorèse mais bien une chromatographie. Vous le verrez au S2 en détail Pour le poids moléculaire, il faut faire SDS PAGE. = électrophorèse Une électrophorèse étudie soit les protéines à l'état naturel = repliées, dans le cas de l'iso électrofocalisation IEF, tu obtiens donc le point isoélectrique. Soit des protéines dénaturées, avec un agent comme tu l'as rappelé, et dans ce cas tu obtiens en plus du pI le poids moléculaire. = électrophorèse 2D Une électrophorèse fait migrer les protéines sous un champs électrique. Une chromatographie c'est par exemple échange d'ions sur colonne. Vous verrez le reste au S2 ! C'est des techniques plus badass, comme la colonne d'exclusion qui piège les grosses protéines. Aie Aie Aie... j'ai rencontré un problème existentiel pas existentiel: "Un gel d’électrophorèse est utilisé pour vérifier que la PCR a bien eu lieu et pour vérifier la taille des produits obtenus afin de détecter une éventuelle mutation par exemple." Comment est-ce possible cela sachant que c'est la taille et non pas le poids ou l'électoneutralité ? je suis désolé Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sélénocystéine Posted December 7, 2021 Share Posted December 7, 2021 (edited) il y a 50 minutes, Couzouféroce a dit : "Un gel d’électrophorèse est utilisé pour vérifier que la PCR a bien eu lieu et pour vérifier la taille des produits obtenus afin de détecter une éventuelle mutation par exemple." Comment est-ce possible cela sachant que c'est la taille et non pas le poids ou l'électoneutralité ? Salut ! Pour vérifier le produit d'une PCR, on va faire en sorte que les produits soient tous chargés de la même manière pour que ça n'influence pas la migration ! Et pour moi, le poids ou la taille de la molécule, c'est la même chose. Edited December 7, 2021 by Sélénocystéine Couzouféroce 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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