Techniques d'amplification d'adn

[unePASSionnée]

Cc !

 

Lors du dernier TD de génome la prof nous a clairement dit qu'il fallait apprendre et savoir interpréter les 4 techniques d'amplification d'ADN qu'on a cette année au programme: RT-PCR classique (avec ou sans fluorescence) et PCR classique et le reste j'ai pas pu noter. En regardant mon cours je n'ai trouvé que PCR et RT-PCR habituelles. 

 

Est-ce que quelqu'un saurait me dire quelles sont les techniques d'amplification qu'il faut connaître pour cette année et les grandes lignes de chacune ? 

 

MERCI 

Edited December 1, 2021 by unePASSionnée

[Vanellope]

Coucou @unePASSionnée!!

 

Je pense que vous devez avoir la PCR et la RT-pCR classiques ainsi que la PCR et RT-PCR quantitatives. Est-ce que ça te parle ?

 

PCR classique : 

L'objectif est de d'amplifier une séquence nucléotidique.

Tu prends ta séquence d'ADN que tu souhaites amplifier, et, tu apparies des amorces ARN pour que la Taq polymérase puisse apparier chacun des brins de ta séquence à amplifier avec une amorce.

Tu répètes 30-40 fois, un cycle de dénaturation à haute température (94°C) - hybridations des amorces (60°C) - élongation (74°C).

Le tout est déposé sur un gel d'électrophorèse pour effectuer une séparation selon les poids moléculaires.

 

RT-PCR classique :

C'est le même principe que la PCR sauf qu'ici tu amplifies des séquences d'ADNc.

Tu pars d'une séquence d'ARN qui doit une subir une reverse transcription. Tu obtiens un hybride ADNc/ARN où l'ARN est détruit et ensuite, tu amplifies la séquence d'ADNc comme précédemment.

 

RT-PCR quantitative : 

On cherche à détecter la présence d'une séquence d'ARNm en temps réel.

Ici aussi, il faudra reverse transcrire ta séquence d'ARNm et ajouter une molécule fluorescente, le SYBRgreen qui s'insère dans le petit sillon de l'ADN.

Ainsi, lors de la phase exponentielle, la quantité d'acide nucléique est proportionnelle à la fluorescence de la solution.

=> Tu mesures en temps réel la quantité d'ADNc amplifiés.

 

PCR quantitative :

C'est une PCR où tu mesures en temps réel la fluorescence qui est, elle-même, le reflet de l'amplification de ta séquence d'ADN.

 

Est-ce que c'est plus clair pour toi ? 

 

Bon après midi !

[unePASSionnée]

MERCIII BCP @Vanellope !