activité enzymatique & antigène

[lilythium]

bonjour !

quelqu'un pourrait m'expliquer le lien entre activité enzymatique et antigène dans ces techniques svp ?

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[marie570]

Salut @lilythium !!!

 

Alors en faite quand tu fais une technique d'ELISA tu vas utiliser une enzyme et son substrat pour détecter la présence et doser tes anticorps (ELISA indirect) ou tes antigènes (ELISA sandwich). 

Ducoup si tu détectes une activité enzymatique ce que : 

1) soit, ton anticorps secondaire (Ac II) qui portait l'enzyme à bien détecter l'antigène reconnu par l'anticorps primaire (Ac I) (ELISA sandwich)

2) soit, ton anticorps secondaire (Ac II) qui portait l'enzyme à bien détecter l'anticorps primaire (Ac I) qui a reconnu l'antigène (ELISA indirecte)

 

Donc, quand on te dis qu'avec un dosage d'antigène compétitif, l'activité enzymatique est inversement proportionnelle à la quantité d'antigène à doser c'est parce qu'il y a une compétition entre l'antigène à doser (celui que tu veux) et l'antigène marqué (celui que tu veux pas). Et comme c'est l'antigène marqué qui porte l'enzyme qui produit l'activité enzymatique, l'activité mesurée n'est pas celle de l'antigène que tu cherche à doser donc inversement proportionnelle. 

 

Et quand on te dis qu'avec un dosage d'antigène non compétitif, l'activité enzymatique est proportionnelle à la quantité d'antigène à doser c'est parce que l'anticorps qui porte l'enzyme (AC II) s'est fixé sur l'antigène que tu cherches à doser directement, donc il y a bien proportionnalité entre ta quantité d'antigène et ton activité. 

 

Le prof vous a surtout parlé de l'ELISA sandwich ou du dosage non compétitif en cours. 

 

J'espère avoir pu répondre à ta question, n'hésites pas si tu en as d'autres  

 

Bon courage 

[lilythium]

Le 23/03/2021 à 19:15, marie570 a dit :

Donc, quand on te dis qu'avec un dosage d'antigène compétitif, l'activité enzymatique est inversement proportionnelle à la quantité d'antigène à doser c'est parce qu'il y a une compétition entre l'antigène à doser (celui que tu veux) et l'antigène marqué (celui que tu veux pas). Et comme c'est l'antigène marqué qui porte l'enzyme qui produit l'activité enzymatique, l'activité mesurée n'est pas celle de l'antigène que tu cherche à doser donc inversement proportionnelle. 

donc ça c'est ELISA sandwich

 

Le 23/03/2021 à 19:15, marie570 a dit :

Et quand on te dis qu'avec un dosage d'antigène non compétitif, l'activité enzymatique est proportionnelle à la quantité d'antigène à doser c'est parce que l'anticorps qui porte l'enzyme (AC II) s'est fixé sur l'antigène que tu cherches à doser directement, donc il y a bien proportionnalité entre ta quantité d'antigène et ton activité. 

et ça c'est ELISA indirecte c'est ça ?

[marie570]

Alors quand on te parle de dosage d'antigène non compétitif c'est l'ELISA sandwich. Tu vas utiliser un anticorps primaire de capture et un anticorps secondaire marqué de révélation et entre ces deux anticorps tu vas avoir l'antigène pris en "sandwich". 

 

Le dosage d'antigène compétitif c'est pas de l'ELISA sandwich ni de l'ELISA indirecte (parce que tu doses les anticorps avec pas les antigènes). C'est une autre technique d'ELISA qu'on appelle ELISA compétitif quand tu mets en présence à la fois un antigène à doser et un antigène marqué avec un anticorps fixé et que ducoup tu as une compétition entre les deux antigènes. 

 

J'espère que les schémas t'aident à mieux comprendre. 
Si jamais tu as des questions n'hésites pas