étude des partenaires protéiques

[Ilyatrogène]

Salut, j'ai du mal à comprendre ce que font les études des partenaires protéiques dans le cours de ILM et comment ça fonctionne notamment pour l'immunoprécipitation et pull down

Est-ce que qqun peut m'expliquer svp ?

Merci d'avance ; )

[EmmaFerjani]

Salut! 

En gros, le but est de voir si ta protéine intéragit avec une autre protéine. 

Cela se fait grace à de l'immunoprécipitation ou GST-Pull Down

 

Pour l'immunoprécipitation, on utilise un Ac dirigé contre la protéine d'interet, et la protéine 'partenaire'. 

Si sur ta piste, tu observes les deux bandes correspondant aux 2 protéines mais dans les mêmes conditions expérimentales, si dans ton lysat tu n'as pas la protéine d'interet, et si tu diriges un Ac contre cette première protéine d'interet et que tu ne trouves pas de bande correspondant au partenaire, cela montre qu'il y a interaction. 

 

Pour GST Pull-Down, on utilise des billes liant GST en présence d'extrait protéique et on analyse par WB. C'est un peu le même principe! 

 

C'est plus clair?

[Ilyatrogène]

Le 10/03/2021 à 20:50, EmmaFerjani a dit :

Si sur ta piste, tu observes les deux bandes correspondant aux 2 protéines mais dans les mêmes conditions expérimentales, si dans ton lysat tu n'as pas la protéine d'interet, et si tu diriges un Ac contre cette première protéine d'interet et que tu ne trouves pas de bande correspondant au partenaire, cela montre qu'il y a interaction. 

Salut, merci pour ton explication ! 

Je ne comprends pas bien cette phrase, si on observe les deux bandes comment ça se fait que dans l'extrait protéique il n'y ait pas la protéine d'intérêt ?