Maraichers 2017-2018 Recherche

[juliette5]

Bonjour, je ne comprend pas le raisonnement de QCM même avec la correction, est ce que quelqu'un pourrait m'aider ? 

https://zupimages.net/viewer.php?id=21/10/tdz9.png

https://zupimages.net/viewer.php?id=21/10/ui74.png

merci !

[vb27]

Bonsoir, alors déjà pour réussir ton QCM tu dois revenir sur l'énoncé commun au 3 QCM de ton annale qui te montre les vecteurs utilisés. 

 

 

 

 

Pour l'item A : Ton plasmide contenant donc ton ADNc a une taille de 5500pb. Vide, il fait 4500 pb. Sur la figure 1 tu vois que si tu retires ton ADNc à l'aide de l'enzyme de restriction BamH1 (on sait que c'est BamH1 car c'est l'enzyme qui se retrouve aux deux extrémités de l'ADNc), il fait 1000 pb (4600-3600pb). Donc une fois que tu as inséré ton ADNc dans ton vecteur, tu obtiens un vecteur plein de 5500 pb. 

Donc maintenant pour répondre à l'item on va voir si nos les vecteurs de nos colonies vont bien faire apparaître deux bandes, une à 4500pb  et une à 1000pb et si c'est le cas cela signifie qu'elles ont des plasmides contenant l'ADNc et si on n'obtient qu'une bande à 4500pb cela veut dire que le vecteur est vide.

Donc l'item A est vrai.

 

 

 

Pour l'item B :  On cherche à savoir si l'enzyme de restriction EcoR1 nous permet de savoir si le vecteur a été ingéré dans le bon sens, c'est à dire avec ATG en 5'. 

Sur l'ADNc, on voit que le site de restriction d'EcoR1 se situe à 4100 et que les deux extrémités se situent respectivement à 3600 et à 4600. en faisant un calcul rapide (4100-3600 = 500 et 4600-4100 = 500) on se rencontre que le site est au centre de l'ADNc. De plus, si on regarde le vecteur d'insertion, on voit que le site EcoR1 se trouve à 20pb du site BamH1. On sait grâce à l'item précédent que l'insertion se fait par BamH1. Donc : 

On doit donc obtenir, peut importe que le sens d'insertion soit le bon ou pas deux bandes de 4980 pb et 520 pb.

Donc l'item B est faux

 

 

 

Pour l'item C : Pour savoir si l'ADNc a été inséré dans le bon ou le mauvais sens, il faut donc se concentrer sur la digestion par Hind3. En effet, étant plus proche de l'extrémité 5' que de la 3', la taille des fragments permettra de savoir le sens de l'insertion.

Sur le même principe que l'item B on cherche la taille des 2 fragments, avec le site de Hind3 côté 5' et Hind3 côté 3'.

 

 

L'ADNc inséré dans le bon sens donne 2 bandes, une de 210 pb et une de 5290 pb.

L'ADNc inséré dans le mauvais sens donne 2 bandes, une de 810 pb et une de 4690 pb.

Si l'ADNc est inséré dans le bon sens, on pourra faire une transcription de l'ADN à partir de son promoteur.

Pour la colonie 4 on voit des bandes qui semblent correspondre à une insertion dans le mauvais sens.

Donc l'item C est faux.

Cependant dans la correction il est noté vrai mais pour moi c'est un errata. 

 

 

 

Pour l'item D : Il faut ici regarder comme au QCM précédent la taille des fragments digérés par Hind3. Ici on voit une bande inférieure à 500 pb et une supérieure à 5000 pb donc on peut en conclure que l'insertion se fait dans le bon sens.

L'item D est donc vrai.

 

 

 

Pour l'item E : Pour ce dernier item, la protéine est cytosolique (dit dans l'énoncé), cela signifie qu'elle reste dans le cytosol de la cellule et donc qu'elle n'est pas sécrété à l'extérieur de la cellule. Donc si on récupère le milieu de culture dans lequel on grandit nos cellules, on ne risque pas de retrouver la protéine, à moins de les lyser.

L'item E est donc faux.

 

 

 

Voila, j'espère t'avoir aidé à comprendre comment résoudre ce type d'exercice, et si tu as un problème de compréhension de mes explications, hésite pas à demander.

Bon courage à toi en tout cas!

 

 

 

 

[juliette5]

Oui, j'ai beaucoup mieux compris. Merci beaucoup pour ton explication, elle est super bien faite!!