élution PH

[loli]

Et bien le bonsoir,

je me demande comment la variation de PH intervient comme éluant avec les différentes méthodes de chromatographies (ex: chromatographie hydrophobe et échangeuse d'ions) est ce que cela marche dans le même sens que les solutions salines ? 

merci bien 

[Hypnos]

Salut @loli

pour le pH il faut regarder les charges des molécules à éluer.

en effet, quand tu pousses le pH aux extrêmes, tu vas avoir des molécules très chargées, et donc elles ne vont plus etre retenue 

 

pour ce qui est de l’échangeuse d’ions, cela va dépendre du pHi des molécules à eluer et de type de charge de ta chromato

 

si elle est positive, elle retient les négatives, il faut donc modifier le pH pour que les molécules deviennent positives, Et inversement quand elle est chargée négativement.

 

pour l’elution en augmentant les charges ioniques, tu mets une solution de NaCl de concentration croissante. Ainsi, que ça soit négative ou positive, tu auras du Na + ou du Cl-, donf chaque charge marchera peu importe la chroma

 

est-ce plus clair ?

[Rebeccathéter]

bien le bonsoir,

 

Je ne dirais pas que cela fonctionne comme les solutions salines car celles-ci jouent sur la force ionique (regarde : chromatographie hydrophobe - UE8 - TC Recherche - Tutorat Associatif Toulousain (tutoweb.org) )

 

Pour la chromatographie échangeuse d'ions, la force de rétention est fonction de la charge : or, la charge d'une protéine est différente en fonction de son pI et du pH. Il faut retenir que:

-> si pI = pH, la charge nette de la protéine est nulle

->si pH > pI, la charge nette de la protéine est négative -

-> si pH < pI, la charge nette de la protéine est positive +

 

Si tu te demandes pourquoi, quand le pH < pI, c'est comme s'il y avait des protons en excès par rapport à ce dont la protéine "a besoin" pour que tous ses groupements ionisables soient sous la forme protonée, c'est-à-dire chargée + ou neutre : elle est sous forme protonée donc + alors que quand pH > pI, c'est comme s'il n'y avait pas assez de protons, donc elle est sous forme déprotonée donc -.

Dans cette chromatographie, on fait progressivement monter le pH de la solution d'élution et les protéines d'abord retenues se détacheront au fur et à mesure que la pH aura atteint leur pI et l'aura dépassé

 

Pour la chromatographie hydrophobe, il ne me semble pas qu'on joue sur le pH mais sur la force ionique comme l'explique @windu.

 

Pour la chromatographie par affinité, j'imagine que certaines liaisons faibles ne peuvent s'établir que si la protéine a ses groupements ionisables sous forme protonée ou déprotonée (par exemple : COOH et COOH peuvent établir des liaisons H mais COO- et COO- ne peuvent pas car il n'y a plus d'H).

 

Pour la chromatographie par exclusion, on n'utilise pas d'éluant mais une solution tampon.

 

J'espère t'avoir aidé (tu me coupes l'herbe sous le pied @Hypnos)

 

 

[loli]

Merci pour vos réponses si complètes!!! @Hypnos @Rebeccathéter J'ai tout compris