OxyGenS Posted January 28, 2021 Share Posted January 28, 2021 (edited) Bonjour, https://zupimages.net/viewer.php?id=21/04/iwvj.png 1) Bettina nous dit qu'une fois qu'on a identifié les animaux hétérozygotes, on en sacrifie un pour vérifier que la séquence d'intérêt s'est bien intégrée dans l'organe voulu. Ça doit être un truc tout bête mais je ne comprends pas comment en vérifiant ça sur un seul animal on est certain que ce sera pareil pour les autres hétérozygotes. 2) On parle de lignée transgénique à partir du moment où on obtient des homozygotes pour le transgène ? Merci Edit : concernant la recombinaison homologue, je n'ai pas saisi l'histoire de s'il y a un guide ou pas alors on a KI ou KO... Edited January 28, 2021 by OxyGenS Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Mazlo Posted January 30, 2021 Ancien Responsable Matière Share Posted January 30, 2021 Saluuut @OxyGenS ! 1) Alors tu parles de la transgenèse additive, une technique qui consiste à modifié génétiquement un œuf fécondé avant la fusion. Les souriceaux obtenus seront soit trangéniques hétéro soit non transgéniques, mais TOUTES les cellules de leurs corps seront identiques (c'est-à dire qu'un souriceau transgénique hétéro aura toutes ses cellules avec un allèle changé et un autre non ! A part le sacrifice de la femelle pour récupérer l'ovule fécondé, on n'a pas de sacrifice de souris (et sûrement pas des souriceaux, auxquels on fait seulement une biopsie de queue pour voir lesquels sont transgéniques). Cette technique est à différencier de la transgénèse par recombinaison où l'on introduit le transgène dans des cellules ES (donc certaines cellules auront le gêne et d'autres non, d'où l'obtention de chimère). 2) Yep. Un extrait de mon cours : "Pour établir les lignées transgénique on fait se reproduire une souris transgénique avec une souris non transgénique puis sur les petits que l’on obtient on fait se reproduire entre eux deux souris transgéniques et ceux jusqu’à ce que toutes les souris qu’elle pourraient engendrer soient transgéniques." Enfin pour le point bonus : Je crois qu'avec crisprcas 9 il y a toujours un ARN guide mais je me rappelle qu'il y avait un truc comme quoi pour un KI il fallait un endroit plus précis que pour un KO mais je n'ai rien vu dans mon cours déso je peux pas t'aider sur le coup Voilà j'espère qu'au moins pour la 1) et la 2) c'est clair ^^ Hypnos 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
OxyGenS Posted January 30, 2021 Author Share Posted January 30, 2021 Salut, merci pour ta réponse Il y a 3 heures, Mazlo a dit : A part le sacrifice de la femelle pour récupérer l'ovule fécondé, on n'a pas de sacrifice de souris (et sûrement pas des souriceaux, auxquels on fait seulement une biopsie de queue pour voir lesquels sont transgéniques). Je me suis trompée dans mon msg initial, j'aurais dû écrire "pr vérifier que notre gène s'exprime dans l'organe voulu". J'en ai discuté avec @Flo2001 , la prof dit qu'on sacrifie un des animaux transgéniques pour vérifier que le gène s'exprime bien par exemple dans la glande mammaire. J'ai une autre question par rapport à ça : elle dit que pour vérifier que le gène s'exprime on fait une RT-PCR. Mais il me semble que très souvent quand on fait de la transgenèse additive c'est pour produire une protéine recombinante, or avec une RT-PCR on vérifie seulement qu'on a l'ARNm, ça ne nous permet pas de conclure que notre protéine est bien produite... il pourrait y avoir un pb/qque chose empêchant la traduction non ? PS : ne m'en voulez pas si je mélange des notions, à force on se fait des nœuds au cerveau Il y a 3 heures, Mazlo a dit : Enfin pour le point bonus : Je crois qu'avec crisprcas 9 il y a toujours un ARN guide mais je me rappelle qu'il y avait un truc comme quoi pour un KI il fallait un endroit plus précis que pour un KO mais je n'ai rien vu dans mon cours déso je peux pas t'aider sur le coup Si qqun d'autre sait je veux bien l'explication sinon peut-être qu'après avoir fait le cours sur crispr-cas9 je comprendrais mieux. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Solution Mazlo Posted January 30, 2021 Ancien Responsable Matière Solution Share Posted January 30, 2021 Il y a 2 heures, OxyGenS a dit : Je me suis trompée dans mon msg initial, j'aurais dû écrire "pr vérifier que notre gène s'exprime dans l'organe voulu". J'en ai discuté avec @Flo2001 , la prof dit qu'on sacrifie un des animaux transgéniques pour vérifier que le gène s'exprime bien par exemple dans la glande mammaire. Hum huum... Boooon, d'aaaaccord... Et elle l'a dis pour la trangénèse additive ou pour les deux ?? Il y a 2 heures, OxyGenS a dit : 'ai une autre question par rapport à ça : elle dit que pour vérifier que le gène s'exprime on fait une RT-PCR. Mais il me semble que très souvent quand on fait de la transgenèse additive c'est pour produire une protéine recombinante, or avec une RT-PCR on vérifie seulement qu'on a l'ARNm, ça ne nous permet pas de conclure que notre protéine est bien produite... il pourrait y avoir un pb/qque chose empêchant la traduction non ? Non elle est pertinente ta question ! Alors oui, c'est vrai que quelque chose pourrait empêcher la traduction mais c'est rare et à ce stade la prof considère que, grosso modo, la quantité de protéines recombinantes produites correspond à la quantité d'ARNm transcrits, donc une augmentation des ARNm de cette protéine visible et significatif en RT-PCR voudra dire que le gêne s'exprime. Il y a 3 heures, OxyGenS a dit : Si qqun d'autre sait je veux bien l'explication sinon peut-être qu'après avoir fait le cours sur crispr-cas9 je comprendrais mieux. Aaaah vous avez pas fait ce cours mais ça va alors on vous l'expliquera en détails pour la recombinaison, avec tous les mécanismes et la différence entre KI et KO ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
OxyGenS Posted January 30, 2021 Author Share Posted January 30, 2021 il y a 15 minutes, Mazlo a dit : Et elle l'a dis pour la trangénèse additive ou pour les deux ?? Je l'ai relevé que pour la transgenèse additive Merci ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Hypnos Posted January 30, 2021 Ancien Responsable Matière Share Posted January 30, 2021 1 hour ago, Mazlo said: Non elle est pertinente ta question ! Alors oui, c'est vrai que quelque chose pourrait empêcher la traduction mais c'est rare et à ce stade la prof considère que, grosso modo, la quantité de protéines recombinantes produites correspond à la quantité d'ARNm transcrits, donc une augmentation des ARNm de cette protéine visible et significatif en RT-PCR voudra dire que le gêne s'exprime. Alors j’aurai tendance à retenir la nuance, toujours à confronter dans les annales mais pour vérifier l’expression de PROTÉINES, on fait un WB qui est semi-quantitatif, soit on fait des dosages protéiques + ou - spécifiques 4 hours ago, OxyGenS said: Si qqun d'autre sait je veux bien l'explication sinon peut-être qu'après avoir fait le cours sur crispr-cas9 je comprendrais mieux. Pour moi il vaut mieux attendre le cours sur crispercas9 pour te permettre d’avoir déjà pu digérer KO/KI et les différentes transgeneses. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
OxyGenS Posted January 30, 2021 Author Share Posted January 30, 2021 C'est noté merci @Hypnos ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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