Chromato

[OxyGenS]

Bonjour !

 

1) Pour les protocoles de purification, on aura systématiquement 3 chromato à la suite et tjs les mêmes/même ordre (échangeuse d'ions, gel filtration, affinité) ?

 

2) https://zupimages.net/viewer.php?id=21/04/2ejg.png

E faux : "ce sont des marqueurs de taille". Mais les marqueurs de taille ne sont-ils pas des protéines dont on connaît parfaitement la MM ?

 

3) https://zupimages.net/viewer.php?id=21/04/p30y.png

D faux : "c'est possible mais ce n'est en rien une règle générale".

V0 c'est uniquement le volume nécessaire pour faire sortir le bleu dextran et parfois il se trouve que ce V0 est le même que le Ve de la plus grosse molécule ?

 

E vrai : "tout ce qui se situe au-dessus de la limite d'exclusion sort en même tps, assez rapidement".

On considère tout ce qui est strictement supérieur à la limite d'exclusion c'est ça ?

 

Merci

 

Edit : j'ajoute une question sur le cours : si j'ai bien compris, la concentration de protéines par précipitation peut être utilisée à la fois pour récupérer la fraction soluble (dans l'exemple l'albumine) mais aussi pour récupérer les prot° qui auront précipité. En pratique, ça se fait couramment de récupérer le précipité et de le re-solubiliser ?

Edited January 27, 2021 by OxyGenS

[Hypnos]

Salut @OxyGenS

 

5 hours ago, OxyGenS said:

1) Pour les protocoles de purification, on aura systématiquement 3 chromato à la suite et tjs les mêmes/même ordre (échangeuse d'ions, gel filtration, affinité) ?

Cela va déprendre des caractéristiques de ton mélange initial et de ta prot

par exemple si tu as un mélange avec beaucoup de prot positives (particulier comme exemple mais passons) et ta prot d’intérêt est négative, alors tu fais d’abord une chromatique echnageuse d’ions pour éliminer les plus de prot qui ne t’intéresse pas. Le nombre et l’ordre sont donc variable par rapport aux conditions expérimentales 

 

5 hours ago, OxyGenS said:

 

2) https://zupimages.net/viewer.php?id=21/04/2ejg.png

E faux : "ce sont des marqueurs de taille". Mais les marqueurs de taille ne sont-ils pas des protéines dont on connaît parfaitement la MM ?

L’item est mal formulé, ce qu’il faut retenir c’est que cette colonne correspond à des marqueurs de taille, ensuite cela peut être des molécules différentes (ici le piège n’a pas grand intérêt...)

5 hours ago, OxyGenS said:

3) https://zupimages.net/viewer.php?id=21/04/p30y.png

D faux : "c'est possible mais ce n'est en rien une règle générale".

V0 c'est uniquement le volume nécessaire pour faire sortir le bleu dextran et parfois il se trouve que ce V0 est le même que le Ve de la plus grosse molécule ?

C’est exactement ça 

 

5 hours ago, OxyGenS said:

E vrai : "tout ce qui se situe au-dessus de la limite d'exclusion sort en même tps, assez rapidement".

On considère tout ce qui est strictement supérieur à la limite d'exclusion c'est ça ?

 

Pas de piège entre Str supérieure et supérieur, tu auras toujours des valeurs suffisamment différentes pour trancher

 

5 hours ago, OxyGenS said:

En pratique, ça se fait couramment de récupérer le précipité et de le re-solubiliser ?

Rarement car des fois on peut avoir des modifications définitives des prot par précipitation. Ensuite on peut toujours resolubiliser certaines, ça te sera préciser et tu n’auras pas de questions sur la frequence de cette methode

 

est-ce plus clair ?

[OxyGenS]

il y a une heure, Hypnos a dit :

Cela va déprendre des caractéristiques de ton mélange initial et de ta prot

par exemple si tu as un mélange avec beaucoup de prot positives (particulier comme exemple mais passons) et ta prot d’intérêt est négative, alors tu fais d’abord une chromatique echnageuse d’ions pour éliminer les plus de prot qui ne t’intéresse pas. Le nombre et l’ordre sont donc variable par rapport aux conditions expérimentales 

D'acc je vois. Par contre on aura tjs au moins 2 chromato dans un protocole de purification ?

J'ai posé cette question pcq le 5D est compté vrai : https://zupimages.net/viewer.php?id=21/04/2ejg.png

Ça semble être un item général mais en fait cet item est vrai appliqué à ce QCM car on voit 3 colonnes avec à chaque fois une bande en moins ?

 

il y a une heure, Hypnos a dit :

Il y a 6 heures, OxyGenS a dit :

E vrai : "tout ce qui se situe au-dessus de la limite d'exclusion sort en même tps, assez rapidement".

On considère tout ce qui est strictement supérieur à la limite d'exclusion c'est ça ?

 

Pas de piège entre Str supérieure et supérieur, tu auras toujours des valeurs suffisamment différentes pour trancher

Sauf si je comprends pas bien le QCM, il me semble qu'on nous donne 3 protéines dont une fait 1000 kDa et l'item E est vrai ; c'est bien pcq ils comptent les protéines A et B ?

Est-ce que du coup cet item est limite ?

 

Le reste c'est bon, merci bcp

[Hypnos]

8 hours ago, OxyGenS said:

nous donne 3 protéines dont une fait 1000 kDa et l'item E est vrai ; c'est bien pcq ils comptent les protéines A et B ?

Est-ce que du coup cet item est limite ?

Oui c’est ça normalement 

 

8 hours ago, OxyGenS said:

D'acc je vois. Par contre on aura tjs au moins 2 chromato dans un protocole de purification ?

J'ai posé cette question pcq le 5D est compté vrai : https://zupimages.net/viewer.php?id=21/04/2ejg.png

Ça semble être un item général mais en fait cet item est vrai appliqué à ce QCM car on voit 3 colonnes avec à chaque fois une bande en moins ?

Généralement un protocole est multi étape (nombrE à définir)

 

generalement 1 colonne = une étape, mais tout est normalement détaillé dans l’énoncé 

[OxyGenS]

Merci @Hypnos !