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Bonjour, je n'ai pas compris à quoi correspondait l'étape de lavage durant les chromatographies ni comment l'on fait varier les conditions de pH ou de force de liaison dans la colonne lors de la chromatographie. Est-ce que quelqu'un peut m'expliquer svp. Merci

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  • RM

Helloo @Sulnac!

Tu as plusieurs étapes dans une chromato :

- La charge

- Le lavage

- L'élution

Le lavage nous permet "d'éliminer" les protéines qui n'ont pas d'affinité avec la colonne (donc par exemple, si la phase stationnaire est chargé +, le lavage nous permettra d'obtenir directement les protéines chargées +

La différence avec l'élution, c'est qu'on va décrocher nos protéines retenues (donc généralement, nos protéines d'intérêts) à l'aide d'une solution qui aura plus d'interactions électroniques avec la colonne que notre protéine d'intérêt.

Tu as du voir qu'en faisant varier le pH, une protéine pouvait changer de charge (en passant par exemple, d'une forme acide à basique ou le contraire). C'est pour ça qu'on l'utilise pour éluer nos protéines.

Exemple pratique : on a une colonne chargée -, notre protéine retenue est + (disons qu'elle a un groupement amine NH3+). Si on augmente le pH (on le fait par exemple, passait de 6 à 9), notre NH3+ va se déprotoner en NH2 et la protéine va perdre sa charge +. Cela va réduire son interaction ionique avec la phase stationnaire et elle va donc être éluée !

L'autre méthode, c'est d'utiliser le tampon d'élution NaCl. Si on augmente sa force ionique, on augmente son interaction avec la colonne et il va remplacer la protéine accrochée à la colonne qui va donc être éluée.

 

Est ce que c'est plus clair ? N'hésite pas si tu as des questions 🙂 

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