Techniques :)

[V16]

J'ai un peu de mal avec ces exercices...

je pense que mon raisonnement n'est pas le bon, j'avais cru comprendre que, comme l'endonucléase ClaI (sensible à la méthylation) ne coupait pas l'ADN de l'individu P, son ADN était donc méthylé. Mais l'endonucléase TaqI (insensible à la méthylation) ne coupe pas non plus...

Est ce qu'on pourrait me donner une marche à suivre pour ce genre de qcm de techniques, ceux qui concernent la méthylation, savoir si X est le père de Y.. pour le reste je me débrouille

 

Merciii

 

 

 

J'ai une autre question concernant ce qcm:

pour moi, le patient M1 possède une mutation sur l'exon 1car avec les amorces AS1 et AR1 il n'y a pas de produit d'amplification mais avec les amorces AS2 et AR2, le produit de 1100 pbmontre qu'il n'y a pas d'excision des exons 2, 3, ou 4, je ne comprend pas les items B et C du coup...

Edited December 28, 2020 by V16

[YEAHBOY]

Si une enzyme insensible à la méthylation ne coupe pas ici c'est parce qu'il y a une mutation sur le site du promoteur qui l'empêche de reconnaître le site. A première vue, on peut penser que l'absence de coupure avec ClaI est lié à de la méthylation mais vu que TaqI ne coupe pas c'est que ce profil n'est pas lié à la méthylation mais à une mutation. 

Dans le qcm 13-14 l'intérêt d'utiliser TaqI est de savoir si les profils que tu obtiens avec ClaI sont liés uniquement à de la méthylation. Si TaqI coupe entièrement (individu M et N) c'est que le profil de M et N avec ClaI est uniquement lié à la méthylation. Hors avec P c'est différent (voir justification au-dessus). Ton raisonnement était sur la bon sur le début mais c'est le fait que TaqI ne coupe pas qui t'a perturbé   

 

Sur le QCM de méthylation, tu peux selon moi :

 

- essayer de trouver les différentes possibilités liés au profil des patients puis voir si les items peuvent correspondre (pour t'entraîner et mieux comprendre).

- sinon pour être efficace niveau temps, voir quel profil donnerait ton item s'il était vrai :

 

par exemple pour le 14)A, si le patient N était hétérozygote pour une mutation ATTGAT, avec TaqI on aurait 3 bandes (car un pool de chromosome normal coupé et un autre muté non reconnu donc non coupé), ce qui ne correspond pas donc faux...

 

Après pour l'histoire de qui est le père de qui, il faut que tu regardes le niveau de migration de la bande du X

 

- si l'individu est un garçon, le X transmis est celui de sa mère (le père transmet son Y). Si la mère est homozygote ou hétérozygote sans qu'il y ait d'impact sur la taille du X pas de problème, ses 2 X migrent au même niveau donc tu ne vois q'une bande : il faut que la bande du X du garçon migre au même niveau que celui de sa mère.

Si la maman est hétérozygote avec 2 X de taille différente, il faut que l'X du garçon migre au même niveau que l'un des 2 de la femme.

 

- si l'individu est une fille, pour savoir si un individu est son père il faut que l'un de ses X migre au même niveau que celui de l'homme. idem pour un individu femme.

 

NB : si la bande du X d'un individu ne migre pas au même niveau que ceux d'un autre individu, c'est que ces derniers ne sont pas ses parents

 

Pour le QCM 18, chez le patient M2 il y a bien une mutation qui entraîne la non hybridation de la sonde AS2, cela peut être dû au fait que l'exon 2 est court circuité, car avec AS1 et AR1 on a un produit de 800pb (=exon1+exon3)

 

Chez le patient M1, on n'a pas de produit avec le couple AS1/AR1, cela signifie qu'il y a une mutation qui empêche l'hybridation soit de AS1 ou de AR1. Le produit de 1100 pb montre qu'il n y a pas de défaut de taille de l'exon 3, MAIS DES MUTATIONS QUI N'IMPACTE PAS LA TAILLE D'UN EXON PEUT EMPÊCHER L'HYBRIDATION comme une série de transversion/translation sur le site d'hybridation. Donc on ne peut pas affirmer qu'il n'y a pas de mutations sur l'exon 3.

 

 

 

 

[V16]

Ahhhh d'accord, j'avais pas pensé a tout ça, je comprend mieux ! Merci beaucoup c'est beaucoup plus clair  @BNJ3149A