Nombre d'amorces

[inji_sadek52]

Bonjour!

 

Je voulais savoir si la PCR comme la RT-PCR avait besoin d'amorces? et de combien? Je ne sais pas je confonds toujours et je ne suis pas sur de si elles ont toutes les deux besoins d'amorces ou pas? et est-ce que dans les cours ont a vu une methode qui necessitait pas d'amorces? Merci d'avance ! 

 

 

[SApaces]

Saluut !

 

Alors petit rappel sur la PCR et la RT PCR 

 

La PCR correspond à l'amplification d'ADN. Elle nécessite un couple d'amorce (soit 2 amorces), des dXTP (pour synthétiser l'ADN), l'ADN à amplifier et une Taq polymérase (ADN polymérase thermorésistante).

Elle se réalise en 3 étapes :

1- Dénaturation de l'ADN (séparation des 2 brins)

2- Hybridation des brins d'ADN avec les amorces 

3- Réaction d'élongation

 

La RT-PCR est basée sur le même principe que la PCR normale. La différence est qu'elle utilise de l'ARN comme matériel initial à la place de l'ADN. La RT-PCR correspond à une rétro-transcription : synthèse d'ADNc à partir de l'ARN. 

Il faut en effet un couple d'amorce soit 2 amorces comme pour la PCR normale. 

Remarque : l'ADNc synthétisé lors de la réaction de RT-PCR correspond à de l'ADN complémentaire (sous entendu de l'ARN), c'est à dire qu'il contient uniquement les exons présents dans l'ARN. Il ne faut pas le confondre avec l'ADN génomique qui lui contient tous les exons et les introns. 

 

Voilà, j'espère que ça t'aurait remis le cours en place. Si tu as d'autres questions ou si je n'ai pas répondu à tes questions, n'hésites pas !

 

Bon courage 

 

[inji_sadek52]

il y a 1 minute, SApaces a dit :

Saluut !

 

Alors petit rappel sur la PCR et la RT PCR 

 

La PCR correspond à l'amplification d'ADN. Elle nécessite un couple d'amorce (soit 2 amorces), des dXTP (pour synthétiser l'ADN), l'ADN à amplifier et une Taq polymérase (ADN polymérase thermorésistante).

Elle se réalise en 3 étapes :

1- Dénaturation de l'ADN (séparation des 2 brins)

2- Hybridation des brins d'ADN avec les amorces 

3- Réaction d'élongation

 

La RT-PCR est basée sur le même principe que la PCR normale. La différence est qu'elle utilise de l'ARN comme matériel initial à la place de l'ADN. La RT-PCR correspond à une rétro-transcription : synthèse d'ADNc à partir de l'ARN. 

Il faut en effet un couple d'amorce soit 2 amorces comme pour la PCR normale. 

Remarque : l'ADNc synthétisé lors de la réaction de RT-PCR correspond à de l'ADN complémentaire (sous entendu de l'ARN), c'est à dire qu'il contient uniquement les exons présents dans l'ARN. Il ne faut pas le confondre avec l'ADN génomique qui lui contient tous les exons et les introns. 

 

Voilà, j'espère que ça t'aurait remis le cours en place. Si tu as d'autres questions ou si je n'ai pas répondu à tes questions, n'hésites pas !

 

Bon courage 

 

merci bcp!! mais du coup la RT n'a pas besoin d'amorces n'est-ce pas?

[SApaces]

Du coup si, il faut également des amorces !

[Sulnac]

il y a 3 minutes, SApaces a dit :

Du coup si, il faut également des amorces !

Salut, l'enzyme pour la RT-PCR c'est une transcriptase inverse ? Et est-ce que l'on peut utiliser la technique de SYBR Green pour les deux types de PCR ? Merci

[audreyfdn]

il y a 35 minutes, Sulnac a dit :

Salut, l'enzyme pour la RT-PCR c'est une transcriptase inverse ? Et est-ce que l'on peut utiliser la technique de SYBR Green pour les deux types de PCR ? Merci

Coucou ! oui pour moi, on peut utiliser la technique de SYBR Green pour les deux types de PCR, sachant que cette protéine va s'intercaler entre les brins d'ADN. 

Bon courage pour demain !