lacelluledu66 Posted November 16, 2020 Share Posted November 16, 2020 Bonjour! 1/ est-ce que qqn pourrait m'expliquer le principe général de ce type d'expérience ? svp https://ibb.co/NNLBnsx 2/ comment fait-on les calcul pour les 2 derniers items svp ? https://ibb.co/d4jHz2g 3/ est-ce que vous pouvez m'expliquer pourquoi l'item D de ce qcm est vraie svp https://ibb.co/bFn6K7G merci Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Juliette82 Posted November 16, 2020 Solution Share Posted November 16, 2020 1) Dans ce type d’exo, on veut mettre une séquence particulière dans le plasmide. Pour cela on a des sites de restrictions sur le plasmide et sur la séquence. On te donne également les sites de restrictions détaillés. Pour commencer faut que tu regardes si certains sites de restrictions ont des bouts cohésifs. S’il y en a, tu devras y faire attention parce qu’il faut que ta séquence soit insérée dans le bon sens pour la transcription. Ici on voit que AccI, ClaI et TaqI ont des extrémités cohésives. Sur le fragment de 300pb l’ordre est AccI, BamHI et EcoRI. Et dans le plasmide : ClaI, BamHI, KpnI, EcoRI, XhoI, AccI et XbaI Pour que le fragment soit inséré dans la bonne orientation, il faut que EcoRI soit la deuxième coupure sur le plasmide. En amont, sur le plasmide, il y a les sites ClaI, BamHI et KpnI => on peut couper le plasmide par ClaI (extrémités cohesives avec AccI du fragment) et BamHI. Dans ce cas la ca sera dans la bonne orientation. Si on coupe avec EcorI et AccI sur le fragement et le plasmide, le fragment sera inséré dans la mauvais orientation étant donné que sur le plasmide EcoRI est avant AccI. SI t’arrives pas bien a visualiser faut que tu dessines les sites de restrictions pour les extrémités cohésives, et pour les orientation dans le plasmide. 2) Tout d’abord on sait que : à la fin de n cycles, on obtient 2n exemplaires du fragment d’ADN. Tu sais qu’il y a 27cycles donc 227 = 1,3 x 108 (énoncé) Pour l’item D : Tu multiplie ta quantité d’avant PCR par 1,3 x 108 => 0,03 x 10-12 x 1,3 x 108 = 3 x 10-14 x 1,3 x 108 = 3,9 x 10-6 = 3,9 mg => FAUX Pour l’item E : Tu multiplie ta quantité d’avant PCR par 1,3 x 108=> 0,01 x 10-12 x 1,3 x 108 = 1 x 10-14 x 1,3 x 108 = 1,3 x 10-6 = 1,3 mm => VRAI 3) Pour l’item c : Pour que ton produit de PCR soit amplifié, il faut que les amorces soient positionnées avec le départ au même endroit mais dans les directions opposées, sens et antisens, car on veut le complémentaire du brin sens et le complémentaire du brin antisens. Comme dans le plasmide du QCM que t’as envoyé dans ta question 2). Pour l’item D : il faut faire un traitement avant une PCR comme dénaturer par la châleur pour obtenir des brins monocaténaires sinon ta PCR ne pourra pas se faire, on ne pourra pas copier chaque brin. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
lacelluledu66 Posted November 30, 2020 Author Share Posted November 30, 2020 Le 16/11/2020 à 07:37, Juliette82 a dit : extrémités cohésives @Juliette82coucou! est-ce que tu peux me dire ce que sont les extrémites cohésives? stp en tout cas merci beaucoup pour tes explications!! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
mathilde0865 Posted November 30, 2020 Share Posted November 30, 2020 Il y a 2 heures, Larab a dit : @Juliette82coucou! est-ce que tu peux me dire ce que sont les extrémites cohésives? stp en tout cas merci beaucoup pour tes explications!! Salut ! Dés extrémiste cohésives résultent d une coupure asymétrique de la part de tes enzymes de restrictions (elles ne coupent pas le site en sont milieux ) et libère donc des extrémités de longueurs différentes! Voilà j espère que ça t aidera Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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