Ancien Responsable Matière lajuxtaposé Posted September 7, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted September 7, 2020 Bonsoir la tutosphère ! Petites questions sur le début, histoire d'ancrer de bases solides : - Quelle est la différence entre "comptage de la radioactivité" et "l'autoradiographie" ? - Dans le marquage direct, qui pourrait m'expliquer d'avantage "enzyme révélée par ajout de substrat (peroxydase) - On nous présente le marquage secondaire biotine/streptavidine, mais pourrait-on en faire aussi un marquage primaire biotine/streptavidine ? Merci d'avance à vous Los Bougos la_jadénosine 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Mojito_des_îles Posted September 8, 2020 Share Posted September 8, 2020 salut à toi @lajuxtaposé Il y a 11 heures, lajuxtaposé a dit : - Quelle est la différence entre "comptage de la radioactivité" et "l'autoradiographie" ? Ce que tu dois comprendre dans les deux protocoles présentés c'est que dans l'un tu vas faire un PULSE ou tu vas introduire les précurseurs radio-marqués et ensuite au bout d'un temps t du vas faire le prélèvement de ce que tu as introduit et voir si le précurseur s'est introduit dans la cellule par exemple. Souvent tu utilises le thimidine tritié pour effectuer cela. Tu vas ici comme sur le schéma voir des petits points noirs cela signifie que les précurseurs radiomarqués se sont intégrés donc tu fait une autoradigraphie. Ensuite second protocole tu vas faire un PULSE et tu vas ensuite faire différents prélèvement à des temps différents afin d'observer l'évolution de la radioactivité, on appelle cela la CHASSE et ici tu utilises souvent de la méthionine S35. Si tu remarque que la courbe diminue fortement cela signifie que tu as une dégradation des protéine qui ont intégrer l’élément radioactif et ici on parle donc du comptage de la radioactivité. Il y a 11 heures, lajuxtaposé a dit : - On nous présente le marquage secondaire biotine/streptavidine, mais pourrait-on en faire aussi un marquage primaire biotine/streptavidine ? J'aurai tendance à dire non car pour moi la biotine va reconnaître un territoire cellulaire et la streptavidine lié a une enzyme va elle reconnaître la biotine et c'est bien la définition du marquage indirect (secondaire) tu as besoin ici des deux éléments pour réaliser cette amplification du signal. Il y a 11 heures, lajuxtaposé a dit : - Dans le marquage direct, qui pourrait m'expliquer d'avantage "enzyme révélée par ajout de substrat (peroxydase) Je peux pas t'aider désole il me semble qu'on en parle dans les technique en histo mais j'ai pas encore taffé ce cours là sorry J'espère que j'ai été clair sinon n'hésite pas Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien du Bureau Solution Petit_Bateau Posted September 8, 2020 Ancien du Bureau Solution Share Posted September 8, 2020 Saluuuut @lajuxtaposé, je ne suis pas tout à fait d'accord avec toi @Mojito_des_îles pour la première question (ou alors j'ai mal compris tes propos, donc dis moi si tu pensais pareil ). Il y a 12 heures, lajuxtaposé a dit : - Quelle est la différence entre "comptage de la radioactivité" et "l'autoradiographie" ? Pour faire de l'autoradiographie, on va injecter (ou ingérer) un radio-isotope pour faire de l'imagerie. Dans notre exemple, on veut mettre en évidence l'ADN du noyau, on va donc utiliser de la thymidine tritiée car c'est un marqueur de l'ADN. Ainsi, l'ADN étant marqué, on va pouvoir visualiser la synthèse d'ADN dans le noyau après imagerie ! Et pour la deuxième expérience, la méthode pulse-chasse est utilisée pour suivre un processus cellulaire. On utilise pour ça la radioactivité. Tu vas donc marqué ton milieu (ici avec la méthionine 35S car on veut visualiser la synthèse de protéine): c'est la période de PULSE. Une fois tes cellules marquées tu fais un lavage pour enlever l'excédant de radioactivité, tu places tes cellules radiomarqués dans un milieu sans radiomarqueurs : c'est la période de CHASSE. Ensuite tu observes l'évolution de ta radioactivité qui te donnera des informations sur ce que tu recherches, ici c'est sur la synthèse de protéine. C'est donc ce qu'on appelle le comptage de la radioactivité. Est-ce plus clair ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Mojito_des_îles Posted September 8, 2020 Share Posted September 8, 2020 @Petit_Bateau J'ai essayé de dire ce que tu as très bien expliqué mais bon je ne suis pas aussi bon que toi mdrrr voila donc @lajuxtaposé m'écoute pas sur ce coup la Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien du Bureau Petit_Bateau Posted September 8, 2020 Ancien du Bureau Share Posted September 8, 2020 il y a 2 minutes, Mojito_des_îles a dit : @Petit_Bateau J'ai essayé de dire ce que tu as très bien expliqué mais bon je ne suis pas aussi bon que toi mdrrr voila donc @lajuxtaposé m'écoute pas sur ce coup la On est d'accord c'est le principal, t'es une machine poulet Attendons de voir si c'est claro pour notre cher ami @lajuxtaposé maestro 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière lajuxtaposé Posted September 8, 2020 Author Ancien Responsable Matière Share Posted September 8, 2020 Merci à vous les amis, je vous suis sauf qu'une dernière chose me chagrine : Vous attribuez pour l'exemple 2 du poly le protocole 1 à l'autoradiographie et le protocole 2 au comptage. Sauf qu'il est précisé sur les deux diapos "comptage de la radioactivité OU autoradiographie" ? Bonne journée mes sanchos maestro 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien du Bureau Petit_Bateau Posted September 8, 2020 Ancien du Bureau Share Posted September 8, 2020 On le place comme ça car les petites images que tu vois le montre comme ça. Mais tu peux faire une autoradiographie avec la méthionine 35S sur ton RE pour voir si il y a des protéines par exemple ! Le plus important c'est que tu comprennes les 2 termes il y a 10 minutes, lajuxtaposé a dit : Bonne journée mes sanchos La famille lajuxtaposé 1 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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