Benj152 Posted June 4, 2020 Share Posted June 4, 2020 (edited) Salut! Lorsqu'on nous dit qu'en immunofluorescence indirect on détecte des Ac, quelles informations on peut en tirer ? J'ai encore des hésitation sur ça Parce qu'il peut y avoir plusieurs cas non ? Enfin on peut le faire sur culture de cellule, et en cryocoupe aussi par exemple (ou pas?) ? ET est ce qu'on considère que c'est dénaturant ou pas ? Et quels Ag peut on voir (intracytoplasmique, membranaire..) ? Edited June 4, 2020 by Benj152 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Solution Ratus Posted June 4, 2020 Ancien Responsable Matière Solution Share Posted June 4, 2020 Alors, là c'est une question très vaste, et tout dépend du contexte! Effectivement on peut le faire sur culture de cellule, en cryocoupe, pour la dénaturation cela dépend de si on est en immunotransfert ou en immunoprécipitation... Et si on est en intracytoplasmique ou membranaire, cela dépend de si on nous a dis que l'on fait une perméabilisation de la cellule ou pas... Du coup concrètement, quelles informations cela apporte? Et bien, si tu utilises un seul Ac, tu détectes l'Ag associé tout simplement (généralement avec un meilleur signal), mais tu peux aussi avoir envie d'utiliser plusieurs Ac que tu détectes tous par immunofluorescence indirect, ce qui te permet d'avoir une vision globale! Par exemple, tu peux avoir un type d'Ac pour chaque AQP, et tous les révéler par immunofluorescence indirect, ce qui te permet de détecter toutes les AQP globalement. (Par contre tu ne pourras pas les différencier entre eux) En fait, les possibilités sont assez grande, et il est difficile de te répondre sans exemple. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Benj152 Posted June 4, 2020 Author Share Posted June 4, 2020 @Ratus T'as réponse est parfaite, c'est tout ce que je voulais savoir, merci! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
OxyGenS Posted June 4, 2020 Share Posted June 4, 2020 il y a 42 minutes, Ratus a dit : Par exemple, tu peux avoir un type d'Ac pour chaque AQP, et tous les révéler par immunofluorescence indirect, ce qui te permet de détecter toutes les AQP globalement. (Par contre tu ne pourras pas les différencier entre eux) Je ne sais pas exactement ce que tu entends pas "ne pas pouvoir les différencier" mais on est d'accord que si on met des flurochromes différents pour chaque type d'AC alors on pourra les différencier et voir leur répartition en fct de la couleur globale (superposition des couleurs ou non) ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Benj152 Posted June 4, 2020 Author Share Posted June 4, 2020 (edited) @OxyGenS je pense que c'est dans le cas où on connait déjà les Ac spécifiques des AQP (qu'on peut utiliser plusieurs fluorochromes) Edited June 4, 2020 by Benj152 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
OxyGenS Posted June 4, 2020 Share Posted June 4, 2020 il y a 47 minutes, Benj152 a dit : je pense que c'est dans le cas où on connait déjà les Ac spécifiques des AQP (qu'on peut utiliser plusieurs fluorochromes) Mais pour avoir un type d'Ac par AQP, il faut forcément connaître cette info non ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Ratus Posted June 4, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted June 4, 2020 il y a 51 minutes, OxyGenS a dit : Je ne sais pas exactement ce que tu entends pas "ne pas pouvoir les différencier" mais on est d'accord que si on met des flurochromes différents pour chaque type d'AC alors on pourra les différencier et voir leur répartition en fct de la couleur globale (superposition des couleurs ou non) ? Non car là on parle d'immunofluorescence indirecte : C'est l'Ac secondaire qui va porter le fluorochrome et il va reconnaitre la partie constante des Ac primaire (qui ne varie pas d'un Ac à un autre) donc il ne pourra pas les reconnaitre entre eux et ce marquage ne permettra pas de les différencier. Évidemment, il est possible de faire une immunofluorescence directe où chaque Ac a un fluorochrome différent, ce qui permettra de faire la distinction! (Mais cette technique est plus chère et plus compliquée, donc selon l'objectif on ne va pas forcément l'employer) Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
OxyGenS Posted June 4, 2020 Share Posted June 4, 2020 Oups @Ratus j'ai lu trop vite dsl. Merci pour le rappel ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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