Larastapouette Posted June 3, 2020 Share Posted June 3, 2020 salut, j'ai beaucoup de question d'immuno, si quelqu'un s'en sent le courage  1) deux questions sur le TD qu'on a eu en prĂ©sentiel, https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/gbwh.png dans l'exercice 1 pour l'item 2b j'ai un soucis car il est comptĂ© vrai mais la mĂ©thode est dĂ©naturante alors ça me bloque parce que je me dis que la dĂ©naturation va changer la conformation des anticorps que l'on veut dĂ©tecter ensuite pour le 3c (toujours exercice 1) dĂ©jĂ j'ai du mal avec la notion de partenaire de fusion car pour moi c'est plutĂŽt un myĂ©lome (comme Ă©crit dans le cours) et lĂ on nous parle de lymphocyte Ducoup je suis un peu perdue  2) est ce que la mĂ©thode d'immuno-transfert est considĂ©rĂ©e comme semi-quantitative ?  3) lorsque 2 Acmc reconnaissent la mĂȘme protĂ©ine est ce qu'ils reconnaissent forcĂ©ment le mĂȘme Ă©pitope ?  4) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/8lku.png je ne comprends pas pourquoi la C est fausse car pour moi c'est bien cette mĂ©thode qui nous permet d'avoir le Pi  5) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/3aj1.png https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/tx4f.png (j'ai mis le sujet en 2 parties) ici je ne comprends pas pour quoi la A est vrai, on nous dit "LES protĂ©ines" alors que ça en est une seule et unique la protĂ©ine de 575 c'est juste quelle est reconnue par l'As et l'Acmc, je ne comprends pas pourquoi on dirai qu'il y en a plusieurs  6) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/3c3i.png pour ce QCM j'ai un problĂšme avec l'analyse des expĂ©riences ce qui fait que je ne comprends pas bien les rĂ©ponses aux QCM qui suivent, enfet je sait pas trop ce qu'il faut dĂ©duire notamment pour l'Ac 4, les 2 mĂ©thodes prĂ©sentĂ©es sont dĂ©naturantes et Ducoup ça me perturbe, je ne sais pas qu'est ce que cela implique le fait qu'il y ait radio marquage ou pas dans ces expĂ©riences les items que je comprends pas sont pour le QCM 12 le C qui est vrai https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/2ga8.png pour le QCM 13 le c et le D qui sont vrais https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/qt6v.png pour le QCM 14 le A qui est faux  7) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/7c6b.png ici je ne comprends pas les items A et D qui sont vrais  8 ) est ce que les hybridome produits (dans le cadre de la production d'un Acmc, il existe d'autres situations oĂč on en produits?) sont forcĂ©ment sĂ©crĂ©teurs ?  9) je ne comprends pas l'item C de ce QCM qui est vrai, je ne comprends pas comment on va enrichir en cellule, de plus Cp a un marquage cytoplasmique ce qui pour moi engendre la nĂ©cessitĂ© de permĂ©abiliser la cellule non ?  merci d'avance pour vos rĂ©ponses (et votre courage) Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Metallica Posted June 3, 2020 Solution Share Posted June 3, 2020 Yoooo @Lara-bl  Alors alors  il y a 10 minutes, Lara-bl a dit : dans l'exercice 1 pour l'item 2b j'ai un soucis car il est comptĂ© vrai mais la mĂ©thode est dĂ©naturante alors ça me bloque parce que je me dis que la dĂ©naturation va changer la conformation des anticorps que l'on veut dĂ©tecter  ça poserait problĂšme si l'on utilisait que des Ac secondaires spĂ©cifique dĂ©pitopes conformationnels sur les AAF mais bon c'est un cas de figure parmi d'autres et en pratique tu auras des Ac reconnaissant des Ă©pi sĂ©quentiels et d'autres reconnaissant des Ă©pitopes conformationnels du coup ça ne posera pas de problĂšme dans la mesure ou l'item Ă©voque juste l'utilisation d'un immunotransfert.   il y a 14 minutes, Lara-bl a dit : ensuite pour le 3c (toujours exercice 1) dĂ©jĂ j'ai du mal avec la notion de partenaire de fusion car pour moi c'est plutĂŽt un myĂ©lome (comme Ă©crit dans le cours) et lĂ on nous parle de lymphocyte Ducoup je suis un peu perdue  Je vois pas trop ou est le problĂšme.. la fusion fait intervenir des cellules de myĂ©lome malin comme tu l'as dit et un lymphocyte B sĂ©crĂ©tant des Anticorps spĂ©cifique et ici ce sont les lymphocytes B et plasmocytes sĂ©crĂ©teurs des AFF qui joueront ce rĂŽle  il y a 19 minutes, Lara-bl a dit : 2) est ce que la mĂ©thode d'immuno-transfert est considĂ©rĂ©e comme semi-quantitative ?  Yes  il y a 20 minutes, Lara-bl a dit : 3) lorsque 2 Acmc reconnaissent la mĂȘme protĂ©ine est ce qu'ils reconnaissent forcĂ©ment le mĂȘme Ă©pitope ?  Non pas forcĂ©ment puisque les prots ont une multiplicitĂ© d'Ă©pitopes diffĂ©rents  il y a 20 minutes, Lara-bl a dit : e ne comprends pas pourquoi la C est fausse car pour moi c'est bien cette mĂ©thode qui nous permet d'avoir le Pi  Le Phi pourra ĂȘtre estimĂ© Ă partir de la migration de la protĂ©ine en immunotransfert or on te dit dans l'Ă©noncĂ© qu'il n'y a aucune bande en immunotransfert donc difficile de dĂ©terminer un Phi Ă partir de rien.   il y a 25 minutes, Lara-bl a dit : ici je ne comprends pas pour quoi la A est vrai, on nous dit "LES protĂ©ines" alors que ça en est une seule et unique la protĂ©ine de 575 c'est juste quelle est reconnue par l'As et l'Acmc, je ne comprends pas pourquoi on dirai qu'il y en a plusieurs  Je pense qu'il y a un problĂšme avec l'Ă©noncĂ© de l'item A , de mĂ©moire il me semble que dans l'annale correspondante il est " les protĂ©ines de 575kDa et 85kDa "  il y a 28 minutes, Lara-bl a dit : les items que je comprends pas sont pour le QCM 12 le C qui est vrai  ça t'aide ? il y a 32 minutes, Lara-bl a dit : les 2 mĂ©thodes prĂ©sentĂ©es sont dĂ©naturantes et Ducoup ça me perturbe, je ne sais pas qu'est ce que cela implique le fait qu'il y ait radio marquage ou pas dans ces expĂ©riences  Pas la deuxiĂšme,quand l'immunotransfert est prĂ©cĂ©dĂ© d'une immunoprĂ©cipitation, on pourra en dĂ©duire de par l'immunoprĂ©cipitation, la nature de l'Ă©pitope (3D ou sĂ©quentiel) ...le fait de faire un immunotransfert en suivant n'a plus d'importance une fois que l'immunoprecipitation a Ă©tĂ© faite , il est juste lĂ pour permettre la rĂ©vĂ©lation du complexe qui a Ă©tĂ© immunoprĂ©cipitĂ©  il y a 39 minutes, Lara-bl a dit : pour le QCM 13 le c et le D qui sont vrais  C--> On a deux anticorps reconnaissant l'Ag M donc en fixant un sur support solide et couplant l'autre Ă une enzyme , on peut effectivement Ă©valuer la capacitĂ© des cellules CR Ă sĂ©crĂ©ter l'Ag M en ELISpot. En effet, l'Ag M se fixera sur l'Ac fixĂ© sur support solide et le deuxiĂšme Ac marquĂ© se fixera sur l'Ag M ,il y aura alors,aprĂšs introduction du substrat chromogĂšne,un marquage en forme de spot ,marquage prenant la forme des cellules ayant sĂ©crĂ©tĂ© l'Ag M (ELISpot)  D--> Yep , les deux Ac reconnaissent l'Ag M (deux Ă©pitopes diffĂ©rents en + donc c'est nickel) donc on pourra bien faire un dosage de l'Ag M avec un ELISA sandwich  il y a 51 minutes, Lara-bl a dit : pour le QCM 14 le A qui est faux  l'Ac IV provoque un signal en immunoprecipitation donc l'item est logiquement faux car l'immunoprecipitation est bien une technique in vitro.  il y a 53 minutes, Lara-bl a dit : 7) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/7c6b.png ici je ne comprends pas les items A et D qui sont vrais    VoilĂ pour la D    Et pour la A ben y a pas de grande diffĂ©rence avec l'item D  il y a 56 minutes, Lara-bl a dit : 8 ) est ce que les hybridome produits (dans le cadre de la production d'un Acmc, il existe d'autres situations oĂč on en produits?) sont forcĂ©ment sĂ©crĂ©teurs ?  Yep sinon ça n'aurait pas dâintĂ©rĂȘt   il y a 57 minutes, Lara-bl a dit : ) je ne comprends pas l'item C de ce QCM qui est vrai, je ne comprends pas comment on va enrichir en cellule, de plus Cp a un marquage cytoplasmique ce qui pour moi engendre la nĂ©cessitĂ© de permĂ©abiliser la cellule non ?  Mhhh quel qcm x) ?       Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Larastapouette Posted June 4, 2020 Author Share Posted June 4, 2020 @Metallica waw gĂ©nial merci beaucoup pour tout ça j'ai encore quelques zones floues si tu permets  Il y a 22 heures, Metallica a dit : tu auras des Ac reconnaissant des Ă©pi sĂ©quentiels et d'autres reconnaissant des Ă©pitopes conformationnels comment on peut ĂȘtre sur que l'Ac prĂ©sent dans le sĂ©rum du patient reconnait pas uniquement un Ă©pitope conformationnel sur le FG dĂ©siminĂ© ? car l'immunotransfert c'est dĂ©naturant alors si on a des Ă©pitopes conformationnels ils disparaissent  Il y a 22 heures, Metallica a dit : Pas la deuxiĂšme, la premiĂšre est quand mĂȘme dĂ©naturante ? je crois que non Ducoup Ducoup ça veut dire que l'Ac IV ne reconnait pas l'Ag en condition de base, dans sa conformation d'origine mais qu'il l'a reconnait une fois dĂ©naturĂ©e c'est ça ? mais Ducoup si c'est ça, l'Elisa qu'on utilise aprĂšs n'est pas dĂ©naturant Ducoup comment il va faire pour reconnaitre l'Ă©pitope l'AC IV ? j'ai encore du mal sur celui lĂ Ă comprendre qu'est ce que ça veut dire que le IV donne un signal un coup et aprĂšs plus rien ?  Il y a 22 heures, Metallica a dit : on pourra en dĂ©duire de par l'immunoprĂ©cipitation, la nature de l'Ă©pitope (3D ou sĂ©quentiel) comment on fait pour dĂ©duire ça ?  Il y a 22 heures, Metallica a dit : Mhhh quel qcm x) ? https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/lw72.png oupss j'avais oubliĂ© de mettre l'Ă©noncĂ©Â Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted June 5, 2020 Share Posted June 5, 2020 (edited) Il y a 12 heures, Lara-bl a dit : comment on peut ĂȘtre sur que l'Ac prĂ©sent dans le sĂ©rum du patient reconnait pas uniquement un Ă©pitope conformationnel sur le FG dĂ©siminĂ© ? car l'immunotransfert c'est dĂ©naturant alors si on a des Ă©pitopes conformationnels ils disparaissent  En pratique y aura pleins d'Ac spĂ©cifiques de plein d'Ă©pitopes diffĂ©rents de la fillagrine, c'est pas possible que tu n'aies que des Ac reconnaissant des Ă©pi conformationnels (en plus l'Ag reconnu contient peu d'acides aminĂ©s..ce qui diminue d'autant plus le nb d'Ă©pitopes conformationnels...) et puis encore une fois ça ne reste qu'hypothetique, l'item dit bien on "pourrait" .....que cela soit rĂ©alisable ou non en pratique , la mĂ©thode envisagĂ©e est plausible.  Il y a 12 heures, Lara-bl a dit :  Ducoup ça veut dire que l'Ac IV ne reconnait pas l'Ag en condition de base, dans sa conformation d'origine mais qu'il l'a reconnait une fois dĂ©naturĂ©e c'est ça ?   C'est l'inverse  Il y a 12 heures, Lara-bl a dit : la premiĂšre est quand mĂȘme dĂ©naturante ? je crois que non Ducoup  pardon je me suis trompĂ©,je parlais de la premiĂšre.l'Ă©tape de dĂ©naturation n'a pas d'effet sur la reconnaissance d'un Ă©pitope conformationnel Ă partir du moment ou cette reconnaissance se fait durant l'immunoprecipitation , Ă©tape qui prĂ©cĂšde l'immunotransfert   Regarde ce sujet c'est plus dĂ©taillĂ©  Le 03/06/2020 Ă 17:49, Lara-bl a dit : de plus Cp a un marquage cytoplasmique ce qui pour moi engendre la nĂ©cessitĂ© de permĂ©abiliser la cellule non ?  étude immunocyto/histochimique ne sont pas nĂ©cessairement sur des cellules intactes on peut aussi faire ça sur des coupe cellulaires/tissulaires et donc de ce fait , on a accĂšs Ă tous les Ă©pitopes  Edited June 5, 2020 by Metallica Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Larastapouette Posted June 5, 2020 Author Share Posted June 5, 2020 @Metallica je crois que j'ai tout compris tu gÚre vraiment merci beaucoup Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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