Larastapouette Posted June 3, 2020 Posted June 3, 2020 salut, j'ai beaucoup de question d'immuno, si quelqu'un s'en sent le courage 1) deux questions sur le TD qu'on a eu en présentiel, https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/gbwh.png dans l'exercice 1 pour l'item 2b j'ai un soucis car il est compté vrai mais la méthode est dénaturante alors ça me bloque parce que je me dis que la dénaturation va changer la conformation des anticorps que l'on veut détecter ensuite pour le 3c (toujours exercice 1) déjà j'ai du mal avec la notion de partenaire de fusion car pour moi c'est plutôt un myélome (comme écrit dans le cours) et là on nous parle de lymphocyte Ducoup je suis un peu perdue 2) est ce que la méthode d'immuno-transfert est considérée comme semi-quantitative ? 3) lorsque 2 Acmc reconnaissent la même protéine est ce qu'ils reconnaissent forcément le même épitope ? 4) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/8lku.png je ne comprends pas pourquoi la C est fausse car pour moi c'est bien cette méthode qui nous permet d'avoir le Pi 5) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/3aj1.png https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/tx4f.png (j'ai mis le sujet en 2 parties) ici je ne comprends pas pour quoi la A est vrai, on nous dit "LES protéines" alors que ça en est une seule et unique la protéine de 575 c'est juste quelle est reconnue par l'As et l'Acmc, je ne comprends pas pourquoi on dirai qu'il y en a plusieurs 6) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/3c3i.png pour ce QCM j'ai un problème avec l'analyse des expériences ce qui fait que je ne comprends pas bien les réponses aux QCM qui suivent, enfet je sait pas trop ce qu'il faut déduire notamment pour l'Ac 4, les 2 méthodes présentées sont dénaturantes et Ducoup ça me perturbe, je ne sais pas qu'est ce que cela implique le fait qu'il y ait radio marquage ou pas dans ces expériences les items que je comprends pas sont pour le QCM 12 le C qui est vrai https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/2ga8.png pour le QCM 13 le c et le D qui sont vrais https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/qt6v.png pour le QCM 14 le A qui est faux 7) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/7c6b.png ici je ne comprends pas les items A et D qui sont vrais 8 ) est ce que les hybridome produits (dans le cadre de la production d'un Acmc, il existe d'autres situations où on en produits?) sont forcément sécréteurs ? 9) je ne comprends pas l'item C de ce QCM qui est vrai, je ne comprends pas comment on va enrichir en cellule, de plus Cp a un marquage cytoplasmique ce qui pour moi engendre la nécessité de perméabiliser la cellule non ? merci d'avance pour vos réponses (et votre courage) Quote
Solution Metallica Posted June 3, 2020 Solution Posted June 3, 2020 Yoooo @Lara-bl Alors alors On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: dans l'exercice 1 pour l'item 2b j'ai un soucis car il est compté vrai mais la méthode est dénaturante alors ça me bloque parce que je me dis que la dénaturation va changer la conformation des anticorps que l'on veut détecter Expand ça poserait problème si l'on utilisait que des Ac secondaires spécifique dépitopes conformationnels sur les AAF mais bon c'est un cas de figure parmi d'autres et en pratique tu auras des Ac reconnaissant des épi séquentiels et d'autres reconnaissant des épitopes conformationnels du coup ça ne posera pas de problème dans la mesure ou l'item évoque juste l'utilisation d'un immunotransfert. On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: ensuite pour le 3c (toujours exercice 1) déjà j'ai du mal avec la notion de partenaire de fusion car pour moi c'est plutôt un myélome (comme écrit dans le cours) et là on nous parle de lymphocyte Ducoup je suis un peu perdue Expand Je vois pas trop ou est le problème.. la fusion fait intervenir des cellules de myélome malin comme tu l'as dit et un lymphocyte B sécrétant des Anticorps spécifique et ici ce sont les lymphocytes B et plasmocytes sécréteurs des AFF qui joueront ce rôle On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: 2) est ce que la méthode d'immuno-transfert est considérée comme semi-quantitative ? Expand Yes On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: 3) lorsque 2 Acmc reconnaissent la même protéine est ce qu'ils reconnaissent forcément le même épitope ? Expand Non pas forcément puisque les prots ont une multiplicité d'épitopes différents On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: e ne comprends pas pourquoi la C est fausse car pour moi c'est bien cette méthode qui nous permet d'avoir le Pi Expand Le Phi pourra être estimé à partir de la migration de la protéine en immunotransfert or on te dit dans l'énoncé qu'il n'y a aucune bande en immunotransfert donc difficile de déterminer un Phi à partir de rien. On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: ici je ne comprends pas pour quoi la A est vrai, on nous dit "LES protéines" alors que ça en est une seule et unique la protéine de 575 c'est juste quelle est reconnue par l'As et l'Acmc, je ne comprends pas pourquoi on dirai qu'il y en a plusieurs Expand Je pense qu'il y a un problème avec l'énoncé de l'item A , de mémoire il me semble que dans l'annale correspondante il est " les protéines de 575kDa et 85kDa " On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: les items que je comprends pas sont pour le QCM 12 le C qui est vrai Expand ça t'aide ? On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: les 2 méthodes présentées sont dénaturantes et Ducoup ça me perturbe, je ne sais pas qu'est ce que cela implique le fait qu'il y ait radio marquage ou pas dans ces expériences Expand Pas la deuxième,quand l'immunotransfert est précédé d'une immunoprécipitation, on pourra en déduire de par l'immunoprécipitation, la nature de l'épitope (3D ou séquentiel) ...le fait de faire un immunotransfert en suivant n'a plus d'importance une fois que l'immunoprecipitation a été faite , il est juste là pour permettre la révélation du complexe qui a été immunoprécipité On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: pour le QCM 13 le c et le D qui sont vrais Expand C--> On a deux anticorps reconnaissant l'Ag M donc en fixant un sur support solide et couplant l'autre à une enzyme , on peut effectivement évaluer la capacité des cellules CR à sécréter l'Ag M en ELISpot. En effet, l'Ag M se fixera sur l'Ac fixé sur support solide et le deuxième Ac marqué se fixera sur l'Ag M ,il y aura alors,après introduction du substrat chromogène,un marquage en forme de spot ,marquage prenant la forme des cellules ayant sécrété l'Ag M (ELISpot) D--> Yep , les deux Ac reconnaissent l'Ag M (deux épitopes différents en + donc c'est nickel) donc on pourra bien faire un dosage de l'Ag M avec un ELISA sandwich On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: pour le QCM 14 le A qui est faux Expand l'Ac IV provoque un signal en immunoprecipitation donc l'item est logiquement faux car l'immunoprecipitation est bien une technique in vitro. On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: 7) https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/7c6b.png ici je ne comprends pas les items A et D qui sont vrais Expand Voilà pour la D Et pour la A ben y a pas de grande différence avec l'item D On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: 8 ) est ce que les hybridome produits (dans le cadre de la production d'un Acmc, il existe d'autres situations où on en produits?) sont forcément sécréteurs ? Expand Yep sinon ça n'aurait pas d’intérêt On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: ) je ne comprends pas l'item C de ce QCM qui est vrai, je ne comprends pas comment on va enrichir en cellule, de plus Cp a un marquage cytoplasmique ce qui pour moi engendre la nécessité de perméabiliser la cellule non ? Expand Mhhh quel qcm x) ? Quote
Larastapouette Posted June 4, 2020 Author Posted June 4, 2020 @Metallica waw génial merci beaucoup pour tout ça j'ai encore quelques zones floues si tu permets On 6/3/2020 at 4:47 PM, Metallica said: tu auras des Ac reconnaissant des épi séquentiels et d'autres reconnaissant des épitopes conformationnels Expand comment on peut être sur que l'Ac présent dans le sérum du patient reconnait pas uniquement un épitope conformationnel sur le FG désiminé ? car l'immunotransfert c'est dénaturant alors si on a des épitopes conformationnels ils disparaissent On 6/3/2020 at 4:47 PM, Metallica said: Pas la deuxième, Expand la première est quand même dénaturante ? je crois que non Ducoup Ducoup ça veut dire que l'Ac IV ne reconnait pas l'Ag en condition de base, dans sa conformation d'origine mais qu'il l'a reconnait une fois dénaturée c'est ça ? mais Ducoup si c'est ça, l'Elisa qu'on utilise après n'est pas dénaturant Ducoup comment il va faire pour reconnaitre l'épitope l'AC IV ? j'ai encore du mal sur celui là à comprendre qu'est ce que ça veut dire que le IV donne un signal un coup et après plus rien ? On 6/3/2020 at 4:47 PM, Metallica said: on pourra en déduire de par l'immunoprécipitation, la nature de l'épitope (3D ou séquentiel) Expand comment on fait pour déduire ça ? On 6/3/2020 at 4:47 PM, Metallica said: Mhhh quel qcm x) ? Expand https://zupimages.net/viewer.php?id=20/23/lw72.png oupss j'avais oublié de mettre l'énoncé Quote
Metallica Posted June 5, 2020 Posted June 5, 2020 (edited) On 6/4/2020 at 3:21 PM, Lara-bl said: comment on peut être sur que l'Ac présent dans le sérum du patient reconnait pas uniquement un épitope conformationnel sur le FG désiminé ? car l'immunotransfert c'est dénaturant alors si on a des épitopes conformationnels ils disparaissent Expand En pratique y aura pleins d'Ac spécifiques de plein d'épitopes différents de la fillagrine, c'est pas possible que tu n'aies que des Ac reconnaissant des épi conformationnels (en plus l'Ag reconnu contient peu d'acides aminés..ce qui diminue d'autant plus le nb d'épitopes conformationnels...) et puis encore une fois ça ne reste qu'hypothetique, l'item dit bien on "pourrait" .....que cela soit réalisable ou non en pratique , la méthode envisagée est plausible. On 6/4/2020 at 3:21 PM, Lara-bl said: Ducoup ça veut dire que l'Ac IV ne reconnait pas l'Ag en condition de base, dans sa conformation d'origine mais qu'il l'a reconnait une fois dénaturée c'est ça ? Expand C'est l'inverse On 6/4/2020 at 3:21 PM, Lara-bl said: la première est quand même dénaturante ? je crois que non Ducoup Expand pardon je me suis trompé,je parlais de la première.l'étape de dénaturation n'a pas d'effet sur la reconnaissance d'un épitope conformationnel à partir du moment ou cette reconnaissance se fait durant l'immunoprecipitation , étape qui précède l'immunotransfert Regarde ce sujet c'est plus détaillé On 6/3/2020 at 3:49 PM, Lara-bl said: de plus Cp a un marquage cytoplasmique ce qui pour moi engendre la nécessité de perméabiliser la cellule non ? Expand étude immunocyto/histochimique ne sont pas nécessairement sur des cellules intactes on peut aussi faire ça sur des coupe cellulaires/tissulaires et donc de ce fait , on a accès à tous les épitopes Edited June 5, 2020 by Metallica Quote
Larastapouette Posted June 5, 2020 Author Posted June 5, 2020 @Metallica je crois que j'ai tout compris tu gère vraiment merci beaucoup Quote
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