Titi-55 Posted June 2, 2020 Share Posted June 2, 2020 Bonjour! J'ai un petit soucis avec le QCM8 item B (faux), de l'annale de Rangueil 2013-14 : Dans le poste [références des items résolus] j'ai trouvé cet réponse : "L'item B est faux car si l'on veut inactiver un gène par le système crelox (gène floxé + recombinase cre) il faut faire des la recombinaison homologue, OR pour faire de la recombinaison homologue, on utilise des cellules souches pas une injection dans un pronucleus mâle." Mais je ne comprend pas… Pour moi à la suite de la recombinaison homologue, on aura créé le gène floxé qu'on réimplantera dans la souris pseudo-gestante, et alors on obtiendra une souris -/- ... non? Je bloque aussi sur l'item A (faux aussi) : En fait je crois que je ne comprend pas le principe de la construction antisens… Si quelqu'un pouvait essayer de m'expliquer, ça m'aiderai bcp!! Merci par avance Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution FromageDeChèvre Posted June 2, 2020 Solution Share Posted June 2, 2020 Salut @Rosa-55 8A : en fait, la construction antisens consiste à introduire par transgenèse additionnelle une séquence codant l'ARN antisens de l'ARNm en question (ici, l'ARNm du gène g). Les 2 ARN vont ainsi s'hybrider et former un ARN bicaténaire, qui sera détruit --> la protéine ne sera donc pas exprimée. L'item est faux car on veut obtenir des souris transgéniques dont les gènes sont invalidés, or, l'intégration se faisant au hasard par transgenèse additionnelle/classique, cette technique ne permet pas d'obtenir des souris -/-. Elle empêche la traduction de l'ARN en protéine, mais n'empêche pas l'expression du gène (les souris ne sont donc pas -/-). 8B : dans le système Cre LoxP, il faut d'abord une souris avec les gènes d'intérêt floxés (séquences LoxP insérées par mutagenèse dirigée avec recombinaison homologue, insertion dans les cellules ES), et une autre souris avec le gène Cre et son promoteur spécifique (Cre inséré aléatoirement, par transgenèse classique). Ensuite, on croise ces souris pour obtenir des souris -/- Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Titi-55 Posted June 2, 2020 Author Share Posted June 2, 2020 Mille mercis !! Juste pour être sûre, à propos de la B, en fait quand on parle d'un gène floxé cela signifie que le gène est encadré par 2 séquences loxP, c'est ça ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
FromageDeChèvre Posted June 2, 2020 Share Posted June 2, 2020 il y a 5 minutes, Rosa-55 a dit : en fait quand on parle d'un gène floxé cela signifie que le gène est encadré par 2 séquences loxP, c'est ça ? Tout à fait Et la recombinase Cre incise l'ADN compris entre les 2 séquences LoxP, qui sont orientées dans le même sens. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Titi-55 Posted June 2, 2020 Author Share Posted June 2, 2020 Super merci beaucoup!! Je pensais que lorsqu'un gène était dit "floxé", c'est qu'il avait déjà était excisé par la rebombinase Cre, c'est pour ça! ^^ Vraiment merci pour tes réponses!! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien du Bureau Fantôme Posted June 7, 2020 Ancien du Bureau Share Posted June 7, 2020 Salut, je profite du sujet, j'espère que quelqu'un verra mon message, j'aimerais savoir pourquoi la E est fausse, avec le croisement on obtient une génération avec homozygotes et hétérozygotes non ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Chat_du_Cheshire Posted June 7, 2020 Share Posted June 7, 2020 il y a 3 minutes, R2019 a dit : Salut, je profite du sujet, j'espère que quelqu'un verra mon message, j'aimerais savoir pourquoi la E est fausse, avec le croisement on obtient une génération avec homozygotes et hétérozygotes non ? @Metallica Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien du Bureau Fantôme Posted June 7, 2020 Ancien du Bureau Share Posted June 7, 2020 (edited) Ah, c'est parceque c'est juste une seule reproduction, on s’arrête à l'étape des chimères en fait, c'est ça ? Mais ca me fait quand même bizzarre , vu que au départ on à déja des +/+ , si on se rate ben on en a , et comme c'est jamais 100% de réussite ... Edited June 7, 2020 by R2019 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted June 7, 2020 Share Posted June 7, 2020 (edited) il y a une heure, R2019 a dit : Salut, je profite du sujet, j'espère que quelqu'un verra mon message, j'aimerais savoir pourquoi la E est fausse, avec le croisement on obtient une génération avec homozygotes et hétérozygotes non ? Ben le truc c'est qu'aucune des souris que l'on va croiser ne possède la caractéristique voulue à savoir surexprimer le cdna spécifiquement dans le FMSS (+/+ TgM) du coup c'est pas en les croisant qu'elle va apparaitre En croisant des +/+ avec des -/- on se retrouvera avec des souris partiellement invalidées (+/-) vis à vis du gène g ce qui ne répond pas du tout à l'objectif initial Edited June 7, 2020 by Metallica Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien du Bureau Fantôme Posted June 7, 2020 Ancien du Bureau Share Posted June 7, 2020 Ah oui, d'où l'importance du "sauvage" entre parenthèses ... J'avais pas fait gaffe ... Merci ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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