lec31 Posted May 27, 2020 Share Posted May 27, 2020 Salut ! J'ai pas mal de questions Est-ce que la chromatographie d'affinité permet de savoir l'état oligomérique d'une protéine (s'il y a un pic = monomérique) ? J'avais compris que ce n'était que la chromatographie d'exclusion qui donnait cette information. Et qu'un seul pic signifiait que la protéine était seule, pure mais pas forcément monomérique. Est-ce que les chromatographies dénaturent les protéines ? Pour une IEF, les protéines basiques migrent vers la cathode ? Et la cathode représente bien le pôle + ? Pour Cas9, c'est de l'ADN ou de l'ARN viral qui infecte la bactérie ? Et le pré-crARN est transcrit à quel moment ? Est-ce qu'il est tout le temps présent dans la bactérie ou il n'est transcrit et ensuite maturé qu'en cas d'infection ? Et pour cet item "l'analyse classique part d'un organisme ou d'une cellule déficiente via un génome cloné", compté vrai. Mais dans l'analyse classique on cherche le gène et la protéine, du coup on ne peut pas créer nous même un organisme déficient. Pour moi, en classique, l'organisme est déficient naturellement, on part donc de la fonction, on remonte au gène puis à la protéine. C'est bien ça ? Enfin, est-ce qu'il y a une différence de rapidité entre LT et LB ? Genre la réponse cellulaire est plus rapide à se mettre en place que la réponse humorale ? Merci d'avance et désolée pour le nombre de questions ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution enerys4 Posted May 28, 2020 Solution Share Posted May 28, 2020 Salut! Je vais essayer de répondre à tout ça ^^ Il y a 18 heures, lec31 a dit : Est-ce que la chromatographie d'affinité permet de savoir l'état oligomérique d'une protéine (s'il y a un pic = monomérique) ? J'avais compris que ce n'était que la chromatographie d'exclusion qui donnait cette information. Et qu'un seul pic signifiait que la protéine était seule, pure mais pas forcément monomérique. Alors ça va dépendre de ta chromatographie mais aussi des conditions dans laquelle tu la réalises. Si tu mets ta protéine en condition dénaturante (avec du SDS-PAGE notamment), ta protéine ne va plus être dans sa conformation tridimensionnelle. Par exemple, tous les ponts disulfures vont se casser. Donc si ta protéine avait des ponts intra-moléculaires ou pas de pont du tout, tu n'auras qu'un seul pic à la sortie de ta chromato. En revanche, si ta protéine faisait des ponts disulfures avec une autre protéine, elles vont se retrouver séparer et elles vont donc être exclues séparément de ta chromato. Tu pourras donc observer deux pics différents. Ensuite, je pense que ça se fait surtout pour la chromato d'exclusion. Je vois pas trop l'intérêt de faire ça en chromato d'affinité. Il y a 18 heures, lec31 a dit : Est-ce que les chromatographies dénaturent les protéines ? Comme je l'ai dit juste au-dessus, il va falloir faire ta chromato en condition dénaturante (avec SDS-PAGE) pour pouvoir dénaturer tes protéines. Les chromato ne dénaturent pas toutes seules tes protéines! Il y a 18 heures, lec31 a dit : Pour une IEF, les protéines basiques migrent vers la cathode ? Et la cathode représente bien le pôle + ? Les molécules chargées + vont vers la cathode, en effet! Et oui il me semble bien que c'est les bases qui vont par là. Et donc les protéines chargées - vont vers l'anode (anode négatif). Donc les acides de ce côté ! Il y a 18 heures, lec31 a dit : Pour Cas9, c'est de l'ADN ou de l'ARN viral qui infecte la bactérie ? Et le pré-crARN est transcrit à quel moment ? Est-ce qu'il est tout le temps présent dans la bactérie ou il n'est transcrit et ensuite maturé qu'en cas d'infection ? Si tu parles des diapos 20 - 21, oui il y a bien écrit que c'est de l'ADN que la bactériophage injecte dans la bactérie. Par contre, pour la suite de tes questions, je ne sais pas du tout. Est-ce que quelqu'un sait quand le pre-crARN est transcrit? Est-il tout le temps transcrit ou uniquement en cas d'infection? Il y a 18 heures, lec31 a dit : Et pour cet item "l'analyse classique part d'un organisme ou d'une cellule déficiente via un génome cloné", compté vrai. Mais dans l'analyse classique on cherche le gène et la protéine, du coup on ne peut pas créer nous même un organisme déficient. Pour moi, en classique, l'organisme est déficient naturellement, on part donc de la fonction, on remonte au gène puis à la protéine. C'est bien ça ? Alors là, je vois de quoi tu parles mais impossible de me souvenir. C'est dans quel cours déjà? Need help Il y a 18 heures, lec31 a dit : Enfin, est-ce qu'il y a une différence de rapidité entre LT et LB ? Genre la réponse cellulaire est plus rapide à se mettre en place que la réponse humorale ? Alors en fait, je ne crois pas que ce soit au programme de savoir ça. Mais les LB ont parfois besoin de certains LT pour être plus rapidement mobilisé. Mais c'est pas toujours le cas. En vrai, je ne sais pas vraiment si une réponse est plus rapide que l'autre. Il faut surtout savoir que ça fait partie de la réponse immunitaire adaptative et que c'est une réponse immunitaire plus longue à se mettre en place par rapport à l'adaptatif. Désolé pour les dernière questions mais j'avoue ne pas tout savoir Donc si quelqu'un veut passer compléter, ça serait super! Pour le reste, est-ce que c'est clair? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière LAmi_Omelette Posted May 28, 2020 Ancien Responsable Matière Share Posted May 28, 2020 il y a 7 minutes, enerys4 a dit : Est-ce que quelqu'un sait quand le pre-crARN est transcrit? Est-il tout le temps transcrit ou uniquement en cas d'infection? On sait juste qu'il est transcrit, on n'a pas de récurrence. il y a 8 minutes, enerys4 a dit : Alors là, je vois de quoi tu parles mais impossible de me souvenir. C'est dans quel cours déjà? Need help L'analyse génétique classique : On cherche le groupe de gène responsable de la déficience, une fois qu’on connait le gène, on le séquence et on compare sa séquence avec des séquences connues par exemple pour voir si ce gène est conservé au cours de l’évolution (si c’est le cas il y a beaucoup de chance que ce soit très important pour la cellule), on explore ensuite le gène pour avoir des informations sur la protéine au niveau des cellules. Puis on peut purifier la protéine pour l’étudier d’un point de vue cellulaire, protéique, et structure. il y a 9 minutes, enerys4 a dit : Donc si quelqu'un veut passer compléter, ça serait super! On n'a là aussi pas de différences temporelles entre les B et T. Sinon merci @enerys4 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
enerys4 Posted May 28, 2020 Share Posted May 28, 2020 (edited) Super! Merci à toi @LAmi_Omelette! Edited May 28, 2020 by enerys4 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
lec31 Posted May 29, 2020 Author Share Posted May 29, 2020 @enerys4 @LAmi_Omelette parfait merci beaucoup ! Il y a 16 heures, enerys4 a dit : Les molécules chargées + vont vers la cathode, en effet! Et oui il me semble bien que c'est les bases qui vont par là. Et donc les protéines chargées - vont vers l'anode (anode négatif). Donc les acides de ce côté ! j'ai un petit problème avec cette réponse @enerys4.... pour moi les protéines basiques sont chargées - comme elles peuvent capter un H+ (AH = A- + H+) Du coup ce serait les protéines négatives qui vont vers la cathode et les positives (acides) qui vont vers l'anode Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
enerys4 Posted May 29, 2020 Share Posted May 29, 2020 (edited) Oui je me suis emmêlée les pinceaux entre base et acide. Base: chargée négativement Acide: chargé positivement Par contre j'aurai quand même dit que les charges négatives allaient vers l'anode. Et du coup que les positives allaient vers la cathode... Mais du coup j'ai un doute Mais il faut bien penser que l'anode est positive. Donc les charges négatives vont vers l'anode. Donc ce sont les bases qui vont vers l'anode. Du moins, c'est comme ça que je le vois. Edited May 29, 2020 by enerys4 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien du Bureau windu Posted May 29, 2020 Ancien du Bureau Share Posted May 29, 2020 Salut ! En fait, l'anode n'est pas toujours le pôle négatif d'un circuit. Elle est définie seulement comme étant le lieu de l'oxydation, dans une pile ce sera bien le pôle négatif, dans un système électrolytique relié à un générateur (cas de tous les systèmes utilisés en recherche) il s'agit du pôle positif. il y a 18 minutes, enerys4 a dit : Oui je me suis emmêlée les pinceaux entre base et acide. Base: chargée négativement Acide: chargé positivement En fait non, tu avais juste, acide = chargé négativement puisque majoritairement sous forme basique dans une solution de pH neutre (comme au lieu de dépôt pour l'IEF). Appliqué à l'IEF, on voit qu'une protéine acide, donc avec pI < pH, est majoritairement sous forme basique donc chargée négativement, et va migrer vers l'anode. Finalement, on retrouve bien les protéines basiques migrant vers la cathode. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
lec31 Posted May 29, 2020 Author Share Posted May 29, 2020 Donc si on récapitule : anode = pôle positif (dans le cas de la recherche), attire les protéines acides qui sont chargées négativement au pH de l'IEF cathode = pôle négatif, attire les protéines basiques chargées positivement C'est ça ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
enerys4 Posted May 29, 2020 Share Posted May 29, 2020 Je dirai que oui Tu es d'accord @windu? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien du Bureau windu Posted May 29, 2020 Ancien du Bureau Share Posted May 29, 2020 C'est ça ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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