CC rangueil 2015

[elisak]

Salut désolé de vous déranger, je ne comprends pas pourquoi la 8A est fausse

Merci par avance !

[special_agent]

Coucou ^^ @ekpaces ici c'est une stratégie de recombinaison homologue et non pas de mutagénèse insertionnelle parceque sinon ton gène g est présent quand même dans tes deux gamètes dcp si tu insere un gène g délété il sera toujours là car présent dans les gamètes de base

Je sais pas si c'est très clair ^^" dis moi tout

[elisak]

Okk je vois à peu près, mais en fait c'est "invalidé" qui me pose problème : si on enlève des exons, le gène g n'est plus fonctionnel

Je vois pas bien la différence avec la recombinaison homologue pour laquelle on invalide le gène en mettant la cassette Néo au milieu (le gène est quand même présent dans la cellule mais non fonctionnel, sauf si je n'ai pas bien compris le principe..?)

Je sais pas si tu vois ce que je veux dire

 

Merci pour ta réponse !

 

[special_agent]

il y a 12 minutes, ekpaces a dit :

 si on enlève des exons, le gène g n'est plus fonctionnel

Oui mais en transgénèse additionnelle on les enlève pas justement, on fait que rajouter un truc vide en l'occurence dans l'exemple. Du coup cette technique était plus utilisée pour faire exprimer un gène et pas pour l'invalider.

PS tu as bien compris la RH

 

[maech]

Comme l'a dit @special_agent, le fait d'ijecter le gène g microdéléter correspond à une transgènèse additionnelle et ne va pas désactiver le gène déjà présent, mais simplement ajouter une fonction délété en plus. Mais comme tu as compris, c'est dans la recombinaison homologue que tu peux invalider un gène  

 

[elisak]

D'accord merci à vous 2 pour vos réponses et votre temps

@special_agent @maech

[LanaBanana]

Salut @ekpaces

 

Edit : Bon je vois qu'il y a déjà beaucoup de réponses mais je poste quand même car j'y ai passé beaucoup de temps 

 

Dans cet item on cherche à invalider (= rendre non fonctionnel) le gène g dans toutes les cellules. Ce gène g il est de base dans l'ADN des pronucleus mâle et femelle, il faut donc faire en sorte qu'il ne soit plus actif dans ces deux pronucleus.

La méthode décrite dans l'item A permet certes d'ajouter un gène g invalidé mais ça ne permet pas de rendre inactif le gène g qui était déjà présent dans les pronucleus mâle et femelle. 

 

En gros c'est un peu comme si ton père te donnait un verre d'eau, ta mère te donnait un deuxième verre d'eau ; puis que moi j'arrivai en te disant "il faut que tu finisse ces verres, ils doivent être vides" et que pour y parvenir je te donnais un verre vide. C'est sympa de te donner un verre vide mais ça ne va clairement pas t'aider à vider les 2 autres, tu comprends ? Ben là c'est un peu la même chose qui se passe avec cette méthode : on donne un gène inactif mais il ne rendra pas les autres inactifs.

Du coup tes souris ne seront pas -/- pour le gène g.

 

 

Ce que voulait dire  @special_agent, c'est que la méthode de l'item B (par recombinaison homologue) est une meilleure méthode pour obtenir des souris -/- pour le gène g.

En fait on va utiliser des cellules souches embryonnaires (= cellules ES) : on prend quelques unes de ces cellules dans un embryon, puis on désactive le gène g de ces cellules par recombinaison homologue. 

 

Principe de la recombinaison homologue : on crée un transgène (c'est un gène mais modifié) qui ressemble beaucoup au gène que tu veux désactiver, avec comme seule différence le fait qu'il ait une séquence Néo dans le premier exon. Comme il y a un truc pas normal en plein milieu de cet exon, il ne fonctionnera plus normalement, et donc la protéine qui sera produite par ce transgène sera différente de celle qui est censée être produite par le gène G normal. Mais EN PLUS de ça, l'exon 1 est celui qui contient le codon initiateur (= ATG), c'est-à-dire le codon qui dit "ok go on produit la protéine !". Mais comme cet exon ne fonctionne plus, l'ATG ne peux plus lancer la production et donc la protéine n'est pas produite.

Enfin, pourquoi on utilise la cassette Néo ? Parce que si tu as bien compris, tu pourrais mettre n'importe quoi dans l'exon 1, cela empêchera toujours l'ATG de produire la protéine. Mais ce qui est bien avec la cassette Néo c'est qu'elle te permet de sélectionner les cellules ES qui ont bien fait la recombinaison (oui parce que cette méthode ne marche pas pour toutes les cellules). Du coup tu balances, du G418 sur tes cellules ES : les cellules qui meurent sont celles qui n'ont pas intégré le transgène (donc on s'en fout d'elles, bye bye) et celles qui survivent sont celles qui ont la cassette Néo dans leur ADN (car Néo permet de résister au G418) et donc celles qui ont bien réussi la recombinaison.

DONC maintenant tu as tes cellules avec le gène g inactif, tu les réimplante dans un embryon. Cet embryon aura des cellules qui ont le gène inactif (c'est-à-dire les cellules ES qu'on vient d'implanter) + des cellules qui ont le gène actif (eh oui car l'embryon dans lequel tu as injecté les cellules ES il avait bien des cellules à la base et ces cellules-là elles ont encore le gène actif). Ce mélange de cellules avec gène actif + cellules sans gène actif, c'est ce qu'on appelle une chimère. Au bout d'un moment, si tu accouple cette souris avec une autre tu pourras obtenir une souris -/- qui a toutes ses cellules avec le gène g invalidé. (Oui j'ai beaucoup raccourci sur la fin parce que mon message est assez long comme ça haha)

 

J'espère que c'est plus clair 

 

 

[elisak]

Salut @LanaBanana

Waw !

C'est vraiment HYPER clair !

Je m'attendais pas à une si belle réponse, je suis contente que tout soit plus clair dans ma tête !

Un grand merci pour ses explications / rappels de cours en plus de la réponse au QCM