Chromatographie en gel d’affinité + structure quaternaire

[Magic]

Salut !

 

Je ne comprends pas bien le principe de chromatographie de chromatographie en gel d’affinité (celle avec 4 pics). Qqun pourrait m’expliquer svp 

 

Aussi, y a-t-il d’autres techniques que la SDS PAGE et l’usage du bêta mercaptoethanol qui modifient la structure quaternaire d’une protéine ?

 

Merci beaucoup d’avance !!!!

[juliewsr]

Salut (désolé pour le retard) !

 

Tu parles de la chromatographie par Gel filtration (chromatographie d'exclusion) ? 

En gros du as une colonne avec un gel de Dextran, qui sont en fait des billes poreuses (avec des petits trous). Donc tu mets ton mélange avec des molécules de taille différentes en haut de la colonne et en descendant, les plus petites molécules sont rentrer dans les petits trou des billes et leur trajet va être allongé/ralenti. Ansi, les grosses molécules sont les premières à sortir puisque qu'elles traversent la colonne sans passer dans aucune bille !

Le volume d'élution correspond au volume qui sort en bas de la colonne et dont tu mesure l'absorbance (pour voir si y'a quelque chose qui sort) → Un pic pour tel volume délétion signifie que quelque chose sort de la colonne. Donc si tu as 2 pics, le premier correspond à un éléments + gros car sorti + tôt (+ petit volume délétion en abscisse).

 

Ensuite, pour déterminer la masse moléculaire de la protéine d'intérêt, on te donne une courbe étalon réalisée à partir de protéines standards dont le PM est connu. Ainsi, tu as une droite qui te donne la relation entre le volume d'élution et le logarithme de leur PM, qui permet de déterminer le PM !

  

 

C'est plus clair ?  

 

Ensuite non, je ne vois pas d'autre technique dénaturante mais l'énoncé peut te dire "on ajoute tel ou tel agent dénaturant"

 

 

[Magic]

Ah c’est gentil merci mais en fait je parlais plutôt de la chromatographie qui fait entrer en jeu le GST GSH etc !

 

Super merci pour les dénaturants !