Benj152 Posted May 21, 2020 Share Posted May 21, 2020 Salut j'ai quelque questions sur la technique du système cre-loxp En faite c'est sur un QCM La correction : QCM 13 : ACE A. VRAI : vous aurez floxé le gène g dans toutes les cellules. Si la séquence située entre les deux séquences LoxP exprime la recombinase Cre alorstout ce qui est compris entre les LoxP sera retiré (il ne restera qu’une séquence LoxP). La recombinase Cre n’étant exprimé que dans les fibres musculaires lisses, cette délétion n’aura lieu que dans ces cellules. - Du coup d'abord pour la A, il faut pas ajouter une molécule ou quelque chose pour activer le promoteur en amont de Cre pour que ça marche ? - Après je voulais savoir : avant de croiser les 2 lignées (celle cre et celle loxp), la recombinaison homologue (pour obtenir la lignée loxp par ex), elle se fait bien seulement sur un seul allèle du gène ? Si oui, du coup quand on a fait toutes les étapes et activé le promoteur cre, l'excision se fait que sur un seul allèle ?? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Metallica Posted May 21, 2020 Solution Share Posted May 21, 2020 (edited) Re ;)) il y a une heure, Benj152 a dit : Du coup d'abord pour la A, il faut pas ajouter une molécule ou quelque chose pour activer le promoteur en amont de Cre pour que ça marche ? Tout dépend du promoteur en fait, il y a des promoteurs inductibles (ce qui correspond à ce que tu as dit) et il y a aussi des promoteurs qui sont constitutivement exprimés dans certains tissus il y a une heure, Benj152 a dit : Après je voulais savoir : avant de croiser les 2 lignées (celle cre et celle loxp), la recombinaison homologue (pour obtenir la lignée loxp par ex), elle se fait bien seulement sur un seul allèle du gène ? Si oui, du coup quand on a fait toutes les étapes et activé le promoteur cre, l'excision se fait que sur un seul allèle ?? dans tous les cas en ce qui concerne les cellules ayant subi le floxage, il n' y aura qu'un seul allèle qui sera transmis à la descendance. Par contre la question se pose pour la souris issue de la transgenèse aléatoire. Peut être qu'elle aussi à subi une étape de mutagénèse dirigée après la mutagenèse aléatoire afin d'avoir elle aussi une version floxée du gène ce qui permettrait d'avoir une invalidation totale (KO) du gène. Peut-être que dans le cours ils considèrent qu'une invalidation partielle suffit à diminuer significativement la production de la prot au point de dire que c'est invalidé mais bon je trouve que l'explication que j'ai citée est plus vraisemblable Edited May 21, 2020 by Metallica Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Benj152 Posted May 21, 2020 Author Share Posted May 21, 2020 (edited) Re! @Metallica D'accord mais du coup pour la A, est ce que le prof pourrait préciser, ou si il dit rien on pourrait que c'est de façon consitituve ? (Dailleurs merci j'avais aucune idée que ça pouvait être de facon constitutive..) Et pour ta deuxième petite explication j'ai pas tout tout pigé aha dsl Edited May 21, 2020 by Benj152 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted May 21, 2020 Share Posted May 21, 2020 il y a 14 minutes, Benj152 a dit : (Dailleurs merci j'avais aucune idée que ça pouvait être de facon constitutive..) Si par exemple tu choisis de surexprimer un gène (en insérant d'autre copie de celui-ci par transgenèse additionnelle) qui est naturellement exprimé dans un type cellulaire et bien ton promoteur sera déjà actif (tu n'auras pas besoin de l'exprimer ;)) il y a 16 minutes, Benj152 a dit : ou si il dit rien on pourrait que c'est de façon constitutive ? Je pense que ça sera jamais dit mais oui il faut toujours partir du principe que la souris possédant le gène floxé et la recombinase vera le gène ciblé totalement invalidé dans les tissus possédant le promoteur activant l'expression de la recombinase il y a 18 minutes, Benj152 a dit : t pour ta deuxième petite explication j'ai pas tout tout pigé aha dsl En fait que le floxage ne se fasse qu'à l'état hétérozygote, ça ne pose pas vraiment de problème puisque dans tous les cas il n'y aura qu'un seul allèle qui sera transmis au souriceau (1 du père un de la mère à chaque fois) ..pour que le souriceau ait deux gène floxés (pour obtenir in fine un KO du gène par la recombinase) il faut que l'autre parent (celui qui a subi la transgenèse aléatoire) ait aussi un floxage du gène situé au niveau même du chromosome ayant la transgenèse aléatoire Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Benj152 Posted May 21, 2020 Author Share Posted May 21, 2020 @Metallica D'accord! Merci encore une fois Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Metallica Posted May 23, 2020 Share Posted May 23, 2020 @Benj152 Je reviens sur ça juste pour dire que tout ce que j'ai dit se réfère au cas ou le transgène qu'on introduit par recombinaison homologue s'apparente à un gène pré-existant mais si en revanche le transgène floxé n'a pas d'équivalent dans le génome alors il n'y aura à se poser de question quant à l'invalidation totale du "gène" Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Benj152 Posted May 23, 2020 Author Share Posted May 23, 2020 @Metallica Oui y'aura pas besoin d'invalider un gène qui n'est déjà pas présent Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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