Immunoanalyse

[Lesapeur]

Bonjour,

A quoi sert la biotyne dans le marquage multicouche ?

 

La technique ELISA Sandwich utilise deux anticorps un de capture et un autre de détection dirigé sur le meme Ag mais sur des epitopes différents. Mais pk ne peut t'on pas l'utiliser pour "doser" des LT CD4+CD8+ en utilisant un récepteur pour chaque Ac ?

[Sashounet]

il y a 2 minutes, etdarre a dit :

A quoi sert la biotyne dans le marquage multicouche ?

Voilà ce que j'ai trouvé :

La famille de protéines de liaison à la biotine comprend la streptavidine, l’avidine..

Les conjugués fluorescents de la streptavidine permettent de détecter les biomolécules biotinylées, comme les anticorps primaires et secondaires, les ligands et les toxines, ou les sondes d’ADN pour une hybridation in situ. Les conjugués enzymatiques de la streptavidine, notamment le HRP et la PA, sont couramment utilisés en Western, ELISA et dans les applications d’imagerie par hybridation in situ.

 

il y a 7 minutes, etdarre a dit :

La technique ELISA Sandwich utilise deux anticorps un de capture et un autre de détection dirigé sur le meme Ag mais sur des epitopes différents. Mais pk ne peut t'on pas l'utiliser pour "doser" des LT CD4+CD8+ en utilisant un récepteur pour chaque Ac ?

ELISA c'est Enzyme Linked Immunosorbent Assay donc c'est pour des protéines ou Ag ou Enzymes..

Au niveau cellulaire on utilise la cytométrie en flux ou ELISPOT ^^

[Lesapeur]

Oui je suis d'accord avec toi, c'est marqué dans le cour que ELISA est réservé aux molécules mais du point de vue de la technique quesqui nous empeche de l'utiliser sur des molécules portées par des cellules?

 

Edited May 19, 2020 by etdarre

[Sashounet]

il y a 10 minutes, etdarre a dit :

du point de vue de la technique quesqui nous empeche de l'utiliser sur des molécules portées par des cellules?

Je ne sais pas du tout désolé, je pense que peut-être ça provient de la taille trop conséquente de la cellule et donc on aurait un signal trop faible....

@enerys4 a l'aide ahahahaha

[enerys4]

il y a une heure, Sashounet a dit :

 

@enerys4 a l'aide ahahahaha

Oulaah ahah, je vais essayer de voler à ton secours

 

Alors je vais surtout faire une énorme hypothèse.

Mais dans la technique ELISA, on fixe des anticorps de capture au fond d'une boite. On met ensuite les antigènes qui vont se fixer à ces anticorps. Et on rajoute au final des anticorps de détection qui vont reconnaitre l'antigène mais sur un site différence de l'anticorps de capture.

 

Mais si tu mets directement des cellules, les cellules peuvent posséder plusieurs fois le même antigène que tu veux doser. Du coup, ça fausserait totalement ton résultat.

Du moins, c'est ce que je pense.

Et puis, comme l'a dit @Sashounet (c'est vraiment trop chou comme pseudo), c'est gros une cellule. Je sais pas si ça se fixerait comme il faut. Peut-être que les cellules fixées aux anticorps empêcheraient d'autres cellules de se fixer sur un AC à côté...

 

Bref, dans tous les cas, la technique ELISA c'est vraiment que pour détecter AC et AG (donc des petites molécules). C'est surtout ça qu'il faut retenir.

Edited May 19, 2020 by enerys4

[Sashounet]

Alalala trop forte @enerys4 !!! En mode Superman et tout... Gg wp

il y a 23 minutes, enerys4 a dit :

@Sashounet (c'est vraiment trop chou comme pseudo)

Merciiiii 

 

[Lesapeur]

il y a 31 minutes, enerys4 a dit :

Oulaah ahah, je vais essayer de voler à ton secours

 

Alors je vais surtout faire une énorme hypothèse.

Mais dans la technique ELISA, on fixe des anticorps de capture au fond d'une boite. On met ensuite les antigènes qui vont se fixer à ces anticorps. Et on rajoute au final des anticorps de détection qui vont reconnaitre l'antigène mais sur un site différence de l'anticorps de capture.

 

Mais si tu mets directement des cellules, les cellules peuvent posséder plusieurs fois le même antigène que tu veux doser. Du coup, ça fausserait totalement ton résultat.

Du moins, c'est ce que je pense.

Et puis, comme l'a dit @Sashounet (c'est vraiment trop chou comme pseudo), c'est gros une cellule. Je sais pas si ça se fixerait comme il faut. Peut-être que les cellules fixées aux anticorps empêcheraient d'autres cellules de se fixer sur un AC à côté...

 

Bref, dans tous les cas, la technique ELISA c'est vraiment que pour détecter AC et AG (donc des petites molécules). C'est surtout ça qu'il faut retenir.

Ah oui effectivement ça dlit etre une des raisons

J'ai une dernière question, sur plusieurs items et qcm on fait reference a une proteine ou gene DICER, c'est hors programme nn ? 

[enerys4]

Oui, DICER est hors programme!

Il me semble que vous auriez du le voir dans le cours sur l'interférence à ARN de Monsieur Olichon.