PhosphatidylFlorine Posted May 19, 2020 Share Posted May 19, 2020 Bonjour, est ce que ce serait possible que l'on m'explique pourquoi cet item est faux s'il vous plaît, à propos de la purification par gel-filtration "Le volume mort contient des protéines que l’on ne souhaite pas purifier." ? La correction indique que l'on ne peut pas retrouver de protéines dans le volume mort mais je comprends encore moins cette justification, pour moi on y trouve les protéines exclues de la colonne donc on trouve bien des protéines. Et j'avais mis vrai à cet item parce que pour moi puisqu'il est possible de fixer une limite d'exclusion c'est que l'on sait que la ou les protéines que l'on cherche à purifier ne seront pas exclues et ainsi qu'elles ne seront pas dans le volume mort non ? Quand on fait ce type de purification on a un petit ordre d'idée de la masse moléculaire de nos protéines à purifier non, du moins suffisamment pour savoir qu'elles ne feront pas partie du volume mort ? Et j'en profite aussi pour poser une autre petite question, est ce que, si l'on sait que pour déterminer le volume mort on utilise du bleu Dextran, on peut dire que V0=Ve du bleu Dextran ? J'avais croisé un item que le considérait faux mais la correction était un peu bancale du coup je voulais savoir ce que vous en pensiez ? Est ce que du fait que le bleu Dextran ne soit pas retenu par la colonne et directement élué on ne peut pas vraiment parler de Ve ? Merci d'avance! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sashounet Posted May 19, 2020 Share Posted May 19, 2020 il y a 3 minutes, Flo2001 a dit : Le volume mort contient des protéines que l’on ne souhaite pas purifier." ? Pour moi c'est Faux, pas pour la raison évoquée mais seulement si on veut purifier une grosse protéine, on peut s'arranger pour qu'il n'y ait que la plus grosse qui tombe et ainsi on a déjà purifié (si c'est celle qui nous intéresse).... Il aurait été plus judicieux de dire : le volume mort peut contenir des protéines que l'on souhaite purifier et là c'est vrai il y a 5 minutes, Flo2001 a dit : Et j'avais mis vrai à cet item parce que pour moi puisqu'il est possible de fixer une limite d'exclusion c'est que l'on sait que la ou les protéines que l'on cherche à purifier ne seront pas exclues et ainsi qu'elles ne seront pas dans le volume mort non ? Quand on fait ce type de purification on a un petit ordre d'idée de la masse moléculaire de nos protéines à purifier non, du moins suffisamment pour savoir qu'elles ne feront pas partie du volume mort ? Exactement, en général on le fait pour des protéines connues, Albumine, et autres protéines sériques par exemple ^^ (je crois, mais à faire vérifier) il y a 8 minutes, Flo2001 a dit : Et j'en profite aussi pour poser une autre petite question, est ce que, si l'on sait que pour déterminer le volume mort on utilise du bleu Dextran, on peut dire que V0=Ve du bleu Dextran ? J'avais croisé un item que le considérait faux mais la correction était un peu bancale du coup je voulais savoir ce que vous en pensiez ? Est ce que du fait que le bleu Dextran ne soit pas retenu par la colonne et directement élué on ne peut pas vraiment parler de Ve ? J'avoue ne pas comprendre ton raisonnement du V0=Ve du bleu Dextran... Car le volume mort c'est la masse de la protéine de plus faible poids moléculaire qui n'est pas retenue dans la colonne, on a donc une définition qui caractérise l'ensemble des protéines à l'intérieur de la colonne et pas une seule espèce chimique comme le bleu Dextran J'espere avoir pu t'aider ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
PhosphatidylFlorine Posted May 19, 2020 Author Share Posted May 19, 2020 il y a 7 minutes, Sashounet a dit : Pour moi c'est Faux, pas pour la raison évoquée mais seulement si on veut purifier une grosse protéine, on peut s'arranger pour qu'il n'y ait que la plus grosse qui tombe et ainsi on a déjà purifié (si c'est celle qui nous intéresse)... Ah oui je vois je n'avais pas pensé à ça ! il y a 8 minutes, Sashounet a dit : J'avoue ne pas comprendre ton raisonnement du V0=Ve du bleu Dextran... Car le volume mort c'est la masse de la protéine de plus faible poids moléculaire qui n'est pas retenue dans la colonne, on a donc une définition qui caractérise l'ensemble des protéines à l'intérieur de la colonne et pas une seule espèce chimique comme le bleu Dextran Et pour celle-ci en fait c'est que pour le QCM on avait un graphique (que je vais essayer de joindre à mon message) et on voyait qu'un seul pic dan la partie correspondant au V0 et c'était le bleu Dextran. Sinon je suis complètement de ton avis, ça caractérise l'ensemble des protéines exclues et pas une seule espèce chimique, mais dans le cas de mon item je me disais que ça pouvait être vrai vu que l'on ne voit aucun autre pic dans le V0. Est ce qu'il faut considérer que d'autres protéines sont dans mon V0 même si on ne perçoit aucun autre pic du coup? En tout cas merci beaucoup pour ton aide @Sashounet ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sashounet Posted May 19, 2020 Share Posted May 19, 2020 il y a 3 minutes, Flo2001 a dit : Est ce qu'il faut considérer que d'autres protéines sont dans mon V0 même si on ne perçoit aucun autre pic du coup? Comme dirait Bettina : ehh ben ouiiiiiii ahaha En vrai, il faut regarder l'énoncé mais qui te dit que le Ferritan est retenu dans la colonne ? Donc par défaut, j'aurais tendance a dire qu'il ne faut pas considérer une espèce unique étant dans le V0 ^^ donc oui il y a 6 minutes, Flo2001 a dit : En tout cas merci beaucoup pour ton aide @Sashounet ! Sah quel plaisir ! Il n'y a pas de quoi ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
PhosphatidylFlorine Posted May 19, 2020 Author Share Posted May 19, 2020 il y a 6 minutes, Sashounet a dit : Comme dirait Bettina : ehh ben ouiiiiiii ahaha En vrai, il faut regarder l'énoncé mais qui te dit que le Ferritan est retenu dans la colonne ? Donc par défaut, j'aurais tendance a dire qu'il ne faut pas considérer une espèce unique étant dans le V0 ^^ donc oui Mais le ferritan il est retenu dans la colonne parce qu'il ne fait pas partie de l'accolade rouge V0 donc pour le coup, on sait qu'il n'est pas dans le V0 pour moi ! Je t'avoue que je ne comprends pas trop ta justification, pour moi c'est possible de n'avoir qu'une seule espèce dans le V0 dans certains cas. D'ailleurs dans la réponse à ma première question comme tu l'as dit on peut établir une limite d'exclusion pour n'avoir que la protéine d'intérêt dans le V0 donc on peut bien n'avoir qu'une espèce dans le volume mort! Mais bon c'est vrai que dans le cours on a un pic unique pour le V0 et pas un pic pour chaque espèce du V0 donc je vais considérer qu'ici V0 n'est pas égal au Ve du Bleu Dextran, ce pic là inclut peut être d'autres espèces inconnues. Merci encore d'avoir pris le temps de me répondre ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sashounet Posted May 19, 2020 Share Posted May 19, 2020 il y a 1 minute, Flo2001 a dit : Mais le ferritan il est retenu dans la colonne parce qu'il ne fait pas partie de l'accolade rouge V0 donc pour le coup, on sait qu'il n'est pas dans le V0 pour moi ! oui tu as raison (j'ai aucune excuse la photo était claire) mais c'est quand même perturbent d'avoir un marqueur protéique qui est considéré comme étant le volume mort (comme ce n'est pas le genre de chose qui tombe au concours..) tu en penses quoi @enerys4 ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
PhosphatidylFlorine Posted May 19, 2020 Author Share Posted May 19, 2020 il y a 6 minutes, Sashounet a dit : (j'ai aucune excuse la photo était claire) Aha pas de souci @Sashounet ! Mais dans le fond je pense que tu as raison, on ne peut pas dire dans mon QCM que V0= Ve du bleu Dextran, le pic qui est annoté "Bleu Dextran" il doit englober toutes les protéines exclues et pas juste le Bleu Dextran, je pense que pour le coup c'est moi qui est mal interprété Je suis désolée je crois que maintenant je t'ai embrouillé alors que pour toi ça paraissait clair dès le départ Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sashounet Posted May 19, 2020 Share Posted May 19, 2020 Ne t'inquiète pas pour moi ahahahah ! J'ai juste essayé de comprendre ce que tu voulais dire mais a priori sur les questions précédentes il n'y avait aucun problème ^^ attend un tuteur si tu veux une meilleure réponse que celle déjà apportée. Passe une bonne journée ! @Flo2001 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution enerys4 Posted May 19, 2020 Solution Share Posted May 19, 2020 (edited) Salut! Alors je vais essayer de répondre méthodiquement et clairement! Il y a 3 heures, Flo2001 a dit : Bonjour, est ce que ce serait possible que l'on m'explique pourquoi cet item est faux s'il vous plaît, à propos de la purification par gel-filtration "Le volume mort contient des protéines que l’on ne souhaite pas purifier." ? La correction indique que l'on ne peut pas retrouver de protéines dans le volume mort mais je comprends encore moins cette justification, pour moi on y trouve les protéines exclues de la colonne donc on trouve bien des protéines. Et j'avais mis vrai à cet item parce que pour moi puisqu'il est possible de fixer une limite d'exclusion c'est que l'on sait que la ou les protéines que l'on cherche à purifier ne seront pas exclues et ainsi qu'elles ne seront pas dans le volume mort non ? Quand on fait ce type de purification on a un petit ordre d'idée de la masse moléculaire de nos protéines à purifier non, du moins suffisamment pour savoir qu'elles ne feront pas partie du volume mort ? Alors, en effet, tu peux retrouver des protéines dans le volume mort. Les protéines exclues des billes vont être éluées très rapidement et vont être retrouvées dans le volume mort. Ensuite, ayant déjà fait ce type de purification, je peux t'assurer qu'on connait la masse moléculaire des protéines que l'on veut récupérer. Donc il suffit de choisir une chromato adaptée pour bien séparer les protéines et récupérer ce que l'on souhaite. Il y a 3 heures, Flo2001 a dit : Et j'en profite aussi pour poser une autre petite question, est ce que, si l'on sait que pour déterminer le volume mort on utilise du bleu Dextran, on peut dire que V0=Ve du bleu Dextran ? J'avais croisé un item que le considérait faux mais la correction était un peu bancale du coup je voulais savoir ce que vous en pensiez ? Est ce que du fait que le bleu Dextran ne soit pas retenu par la colonne et directement élué on ne peut pas vraiment parler de Ve ? On peut dire que V0 = Ve du bleu dextran pour cet exercice. J'ai eu Mme Lajoie et Mme Monferran cette année en pharma. Voici ce qu'elles nous ont écrit dans le poly de biotechnologie sur la purification par chromato d'exclusion: "Les molécules de diamètre supérieure à la taille des mailles de la matrice ne pénètrent pas dans les billes, et restent dans la phase mobile et leur volume d'élution correspond au volume mort V0 (molécules dites "exclues")". Est-ce que j'ai répondu à toutes vos questions avec ça? S'il y en a d'autres, n'hésitez pas! Et si vous êtes pas d'accord, je peux toujours demander à mes RM ^^ Edited May 19, 2020 by enerys4 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
PhosphatidylFlorine Posted May 19, 2020 Author Share Posted May 19, 2020 Génial @enerys4 tu as répondu à toutes nos questions c'est parfait ! Bonne journée à vous 2 @enerys4 et @Sashounet et merci beaucoup pour votre aide ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
enerys4 Posted May 19, 2020 Share Posted May 19, 2020 il y a 2 minutes, Flo2001 a dit : Génial @enerys4 tu as répondu à toutes nos questions c'est parfait ! Bonne journée à vous 2 @enerys4 et @Sashounet et merci beaucoup pour votre aide ! C'était un plaisir de t'aider! Bonne journée à toi aussi Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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