mehday Posted December 13, 2014 Share Posted December 13, 2014 je suis pas sure de bien saisir cette méthode de marquage des sondes (je suis même sure du contraire bref..) je pensai que la DNase I coupai plusieurs fois le simple brin et apres la DNA pol I pour réparer détruit aux alentours et resynthétise avec les nucléotides marqués qu'on lui a fourni mais je crois que c'est pas ça (il y a une histoire de déplacement de la breche ETC.. et surtout ça correspond pas bien avec le schéma du cours ) si quelqu'un pourrait m'éclairer ce serai tres aimable de ça part merci d'avance Link to comment Share on other sites More sharing options...
franckb31 Posted December 13, 2014 Share Posted December 13, 2014 Bonsoir -Dans la technique de nick translation la DNase I fait des coupures simples brins au hasard dans l'ADN, -Ensuite la DNApolymérase I va utiliser le brin complémentaire (celui où il n'y a pas de coupures) comme matrice pour réparer le 1er, en ajoutant les dNTP marqué dans le milieu, comme elle a une activité exonucléasique 5'->3' elle va ensuite enlever les nucléotide en 3' de la coupure et le remplacer par un dNTP du milieu et ainsi de suite, du coup la coupure est "déplacée" au fur et à mesure, et des bases marquées sont ajoutées. Link to comment Share on other sites More sharing options...
mehday Posted December 13, 2014 Author Share Posted December 13, 2014 oui c'est ça que je comprend pas enfaite , DNA pol I va refaire tout le brin ( à partir de la ou elle commence je veux dire) ? parceque là ce que je comprend elle en met un et elle enleve le suivant , elle en remet un et elle enleve le suivant ça fonctionne bien théoriquement mais on a vu le fonctionnement de la DNA pol I en cours (cf fintion de replication et reparation ) et c'est pas trop la présentation qui nous on a été faite du moins il me semble ... merci Link to comment Share on other sites More sharing options...
MelanieK Posted December 14, 2014 Share Posted December 14, 2014 Bonsoir ! Cette méthode de marquage est utilisée pour marquer les sondes (et pas tout l'ADN) qui s'hybrideront à l'ADN. De ce fait, on fait agir la DNAse I et la DNApol I sur un fragment d'ADN qui ne fait qu'une trentaine de nucléotides tout au plus. Etant donné que l'inconvénient de cette technique est que le signal est plutôt faible, on a plutôt intérêt à ce que que la polymérase incorpore des bases marquées sur tout le reste du brin. Cela te semble-t-il plus juste ? Bonne soirée et bon courage pour les révisions ! Link to comment Share on other sites More sharing options...
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