Jujugulaire Posted May 11, 2020 Share Posted May 11, 2020 (edited) Salut, J'ai une petite question concernant CrisprCas 9 Comment être sûr que l'ADN cible possède une séquence PAM, ou bien justement qu'elle n'en possède pas en trop ? Il me semble qu'elles sont du type NGG (Nucléotide-Guanine-Guanine) mais j'imagine que cette répétition est fréquente sur une chromosome. Est-ce que c'est lors de la construction de l'ARN guide qui doit se lier de façon complémentaire qu'on s'assure de construire une séquence qui sera suivie juste après d'une séquence PAM ou ca se passe autrement ? Et si par exemple sur le gène que l'on veut rendre KO ou sur lequel on veut réaliser un KI il n'y a pas du tout de séquence PAM, comment on génère la cassure double brin ? Merci ! Edited May 11, 2020 by juliettef Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution enerys4 Posted May 13, 2020 Solution Share Posted May 13, 2020 (edited) Coucou! Alors, je vais tenter une réponse! Je pense que, généralement, quand la technique du Crisp/Cas9 est utilisée, les chercheurs ont déjà la séquence de l'ADN cible. Ils savent donc ainsi si l'ADN cible possède une ou plusieurs séquences PAM. Si jamais il y en a plusieurs, normalement, l'ARN guide est justement là pour guider Crispr/Cas9, pour pas qu'elle coupe après n'importe quel PAM. Ensuite, je suppose que l'ARN guide est construit en fonction de la séquence de l'ADN cible et de l'emplacement de son motif PAM. Enfin, je pense que la séquence PAM est obligatoire. Donc si pas de séquence PAM, pas de cassure double brin donc pas de Crispr/Cas9. Après si un tuteur ou un de mes merveilleux RM ( @TontonChène et @nour8) ou même un pro de Crispr/Cas9 veut bien venir confirmer ma réponse, je dis pas non! Parce que je dois avouer que tes questions sont assez pointileuses... Et perso le Crispr/Cas9 c'est un des rares chapitres qui m'a laissé dans une incompréhension totale pendant un moment Edited May 13, 2020 by enerys4 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Jujugulaire Posted May 13, 2020 Author Share Posted May 13, 2020 Okk merci bcp pour ta réponse @enerys4 ! Du coup j'imagine que si pas de PAM, on va utiliser une autre technique qu'on n'a pas vue en cours ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
enerys4 Posted May 13, 2020 Share Posted May 13, 2020 Oui j'imagine qu'ils ont d'autres techniques en stock. Mais je n'ai rien vu d'autres donc je ne peux pas te donner d'exemples ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Jujugulaire Posted May 13, 2020 Author Share Posted May 13, 2020 Ok, merci bcp @enerys4 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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