Darsalade Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 BONSOIR CECI EST UN MESSAGE DE LA PUS HAUTE IMPORTANCE VEILLEZ LIRE ATTENTIVEMENT : Non je rigole mdr J'ai un soucis avec l'item 3C du ccb 16-17 : " Si l’on a pratiqué la restriction d’un plasmide et d’un gène d’intérêt par deux enzymes X et Y dites « à bout collant », alors il suffit de mettre les produits de restrictions en présence d’une ligase pour obtenir un produit de ligation" compté fausse Correction : . Cela ne peut marcher qu’avec une enzyme à bout franc, ou 2 enzymes a bouts collants identiques. Avec 2 enzymes à bouts collants différentes il faut faire intervenir une endonucléase et/ou une polymérase afin de retrouver la complémentarité entre les extrémités du plasmide et du gène pour pouvoir l’insérer. J'arrive pas à me représenter schématiquement pourquoi c'est faux parce que pour moi si on utilise 2 enzymes ça va juste rendre l'insert orienté mais ça n'empêchera pas d'avoir un produit de ligation Et vu que le côté où l'enzyme X à coupé du gène se complète avec le côté coupé par X du plasmide, pareil pour Y, je vois pas pourquoi c'est pas possible Merci Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Ancien Responsable Matière Solution TontonChène Posted May 8, 2020 Ancien Responsable Matière Solution Share Posted May 8, 2020 Bonjour ! Je pense qu'ici ils voulaient faire référence au produit de clivage de deux enzymes différentes que l'on veut mettre bout à bout. Une coupée par X et et l'autre par Y (par exemple : on digère le plasmide avec la séquence codante par X et le plasmide receveur par Y. On veut alors intégrer la séquence dans le 2nd plasmide mais les extrémités ne sont pas complémentaires). Si ces deux enzymes sont à bouts francs, alors il n'y a aucun problème pour les liguer car ils se mettent bout à bout. Cependant si on a des bouts collants, il faut recréer en quelque sorte des bouts francs, par des endonucléases ou des exonucléases (cf diapo du cours). Hésite pas à me dire si ce n'est pas clair ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Darsalade Posted May 8, 2020 Author Share Posted May 8, 2020 Aaaaaah d'accooord ! J'avais mal compris ! Ah ducoup c'est plus compréhensible x) Merci bcp grand sage @TontonChène Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Aligot Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 @Sashounet tu parles de cette licorne ? Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Sashounet Posted May 8, 2020 Share Posted May 8, 2020 il y a 14 minutes, Aligot a dit : @Sashounet tu parles de cette licorne ? Oui Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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