Darsalade Posted May 8, 2020 Posted May 8, 2020 BONSOIR CECI EST UN MESSAGE DE LA PUS HAUTE IMPORTANCE VEILLEZ LIRE ATTENTIVEMENT : Non je rigole mdr J'ai un soucis avec l'item 3C du ccb 16-17 : " Si l’on a pratiqué la restriction d’un plasmide et d’un gène d’intérêt par deux enzymes X et Y dites « à bout collant », alors il suffit de mettre les produits de restrictions en présence d’une ligase pour obtenir un produit de ligation" compté fausse Correction : . Cela ne peut marcher qu’avec une enzyme à bout franc, ou 2 enzymes a bouts collants identiques. Avec 2 enzymes à bouts collants différentes il faut faire intervenir une endonucléase et/ou une polymérase afin de retrouver la complémentarité entre les extrémités du plasmide et du gène pour pouvoir l’insérer. J'arrive pas à me représenter schématiquement pourquoi c'est faux parce que pour moi si on utilise 2 enzymes ça va juste rendre l'insert orienté mais ça n'empêchera pas d'avoir un produit de ligation Et vu que le côté où l'enzyme X à coupé du gène se complète avec le côté coupé par X du plasmide, pareil pour Y, je vois pas pourquoi c'est pas possible Merci Quote
Ancien Responsable Matière Solution TontonChène Posted May 8, 2020 Ancien Responsable Matière Solution Posted May 8, 2020 Bonjour ! Je pense qu'ici ils voulaient faire référence au produit de clivage de deux enzymes différentes que l'on veut mettre bout à bout. Une coupée par X et et l'autre par Y (par exemple : on digère le plasmide avec la séquence codante par X et le plasmide receveur par Y. On veut alors intégrer la séquence dans le 2nd plasmide mais les extrémités ne sont pas complémentaires). Si ces deux enzymes sont à bouts francs, alors il n'y a aucun problème pour les liguer car ils se mettent bout à bout. Cependant si on a des bouts collants, il faut recréer en quelque sorte des bouts francs, par des endonucléases ou des exonucléases (cf diapo du cours). Hésite pas à me dire si ce n'est pas clair ! Quote
Darsalade Posted May 8, 2020 Author Posted May 8, 2020 Aaaaaah d'accooord ! J'avais mal compris ! Ah ducoup c'est plus compréhensible x) Merci bcp grand sage @TontonChène Quote
Sashounet Posted May 8, 2020 Posted May 8, 2020 On 5/8/2020 at 6:35 PM, Aligot said: @Sashounet tu parles de cette licorne ? Expand Oui Quote
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