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CCB 2016-2017


Go to solution Solved by TontonChène,

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BONSOIR CECI EST UN MESSAGE DE LA PUS HAUTE IMPORTANCE VEILLEZ LIRE ATTENTIVEMENT :

Non je rigole mdr

J'ai un soucis avec l'item 3C du ccb 16-17 : " Si l’on a pratiqué la restriction d’un plasmide et d’un gène d’intérêt par deux enzymes X et Y dites « à bout collant », alors il suffit de mettre les produits de restrictions en présence d’une ligase pour obtenir un produit de ligation" compté fausse

 

Correction : . Cela ne peut marcher qu’avec une enzyme à bout franc, ou 2 enzymes a bouts collants identiques. Avec 2 enzymes à bouts collants différentes il faut faire intervenir une endonucléase et/ou une polymérase afin de retrouver la complémentarité entre les extrémités du plasmide et du gène pour pouvoir l’insérer.

 

J'arrive pas à me représenter schématiquement pourquoi c'est faux parce que pour moi si on utilise 2 enzymes ça va juste rendre l'insert orienté mais ça n'empêchera pas d'avoir un produit de ligation

Et vu que le côté où l'enzyme X à coupé du gène se complète avec le côté coupé par X du plasmide, pareil pour Y,  je vois pas pourquoi c'est pas possible 

Merci ❤️ 🦄

  • Ancien Responsable Matière
  • Solution
Posted

Bonjour !

 

Je pense qu'ici ils voulaient faire référence au produit de clivage de deux enzymes différentes que l'on veut mettre bout à bout. Une coupée par X et et l'autre par Y (par exemple : on digère le plasmide avec la séquence codante par X et le plasmide receveur par Y. On veut alors intégrer la séquence dans le 2nd plasmide mais les extrémités ne sont pas complémentaires). Si ces deux enzymes sont à bouts francs, alors il n'y a aucun problème pour les liguer car ils se mettent bout à bout. Cependant si on a des bouts collants, il faut recréer en quelque sorte des bouts francs, par des endonucléases ou des exonucléases (cf diapo du cours).

 

Hésite pas à me dire si ce n'est pas clair !

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