paulinemwb Posted May 6, 2020 Share Posted May 6, 2020 Bonjour, Je ne comprends pas pourquoi cet item est compté vrai, quelqu'un pourrait-il m'éclairer ? Je le trouve très confus : on nous parle de cytométrie en flux, puis on évoque des antiC de capture et des antiC de révélation or ceci fait plutôt écho à la technique ELISA. De plus, les 2 antiC possèdent des marqueurs de fluorescence de couleur différente. Je suis perdue. Des chercheurs souhaitent produire du TNF recombinant de souris chez la bactérie E. coli. Dans ce but, ils clonent l'ADN complémentaire (ADNc) codant le TNF (ou Tumor necrosis factor) dans un plasmide d’expression procaryote. Ce plasmide permet l’expression de la protéine d’intérêt avec une étiquette Histidine en C-terminal. Item E : La quantité de TNF recombinant purifié peut être dosée par cytométrie en flux avec un anticorps anti-TNF de capture couplé à une bille fluorescente dans le rouge et un anticorps anti-TNF de révélation couplé à un fluorochrome vert. Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Thiasmine Posted May 7, 2020 Solution Share Posted May 7, 2020 slm @paulinemwb, je ne comprenais pas non plus, mais je te cite un message d’un sujet où @PierrickJunior répond à une question à peu près similaire : « dans l'item on nous dit qu'on passe par une cytométrie en flux. Le principe de la cytométrie va être de dosé et trier différentes populations selon leurs fluorescence (je généralise peut être ou fait un gros raccourcit, mais c'est ce qu'on voit en QCM). Maintenant reprenons l'exemple du TNF. Imagine que le TNF qu'on veuille dosé est celui du plasma d'un patient.. Il faut avoir en tête que les concentrations en TNF a ce niveau là sont de l'ordre du pictogramme/L donc, tu te doutes, très dur à détecter. Du coup premièrement, non la fluorescence ne sera très certainement pas visible à l'oeil nu car trop peu de TNF aillant été capturé. Ensuite, l'utilisation de deux AC, un de capture et un détections va permettre de rendre l'expérience fiable et aussi (même surtout eventuellement) reproductible. Donc la fluorescence présente mais pas forcément visible (en tout cas pas à l'oeil nu) va passer dans une cytométrie en flux pour être dosée et triée. Est ce que c'est plus clair pour toi ? Notamment c'est la notion de petite échelle qui nous oblige à faire tout ca. Sinon n'hésite pas. » Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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