Crispr-cas9

[Lesapeur]

Bonjour,

Je ne comprends pas pourquoi lorsqu'on veut faire exprimer une protéine par exemple la GFP sous le contrôle  d'un promoteur spécifique  on effectue une cdb en dehors du promotteur au niveau de l'adn génomique. 

Pour moi si la cassure se fait en dehors du promoteur alors la recombinaison se fera en dehors du promotteur...

Esque qlq peut m'éclairer sur ce point svp ?

[enerys4]

Je ne suis pas trop sûre de comprendre ta question. Peut-être un schéma serait le bienvenu (ou une explication plus détaillée).

Je vais tenter de reformuler ta question pour être sûre d'avoir compris avant d'essayer de répondre.

 

En gros, tu veux faire exprimer la GFP. Tu fais donc une cassure double brin dans l'ADN génomique (en dehors du promoteur) pour insérer le gène de la GFP dans cet ADN génomique.

On est d'accord que, quand tu dis "en-dehors du promoteur", tu veux dire que le gène de la GFP n'est pas du tout sous contrôle du promoteur? Genre que le gène n'est pas situé entre le promoteur et le terminateur?

Et par recombinaison, tu parles de l'insertion du gène dans l'ADN génomique?

 

Si déjà j'ai compris ça, je pense pouvoir t'aider mais je veux être sûre de pas avoir compris de travers.

Après je t'avoue que je suis pas une pro de Crispr/Cas9 donc si il y a des tuteurs qui passent par là (ou mes RM), hésitez pas à compléter!

[Lesapeur]

il y a une heure, enerys4 a dit :

Je ne suis pas trop sûre de comprendre ta question. Peut-être un schéma serait le bienvenu (ou une explication plus détaillée).

Je vais tenter de reformuler ta question pour être sûre d'avoir compris avant d'essayer de répondre.

 

En gros, tu veux faire exprimer la GFP. Tu fais donc une cassure double brin dans l'ADN génomique (en dehors du promoteur) pour insérer le gène de la GFP dans cet ADN génomique.

On est d'accord que, quand tu dis "en-dehors du promoteur", tu veux dire que le gène de la GFP n'est pas du tout sous contrôle du promoteur? Genre que le gène n'est pas situé entre le promoteur et le terminateur?

Et par recombinaison, tu parles de l'insertion du gène dans l'ADN génomique?

 

Si déjà j'ai compris ça, je pense pouvoir t'aider mais je veux être sûre de pas avoir compris de travers.

Après je t'avoue que je suis pas une pro de Crispr/Cas9 donc si il y a des tuteurs qui passent par là (ou mes RM), hésitez pas à compléter!

Bonjour, 

Oui c'est ça. Je n'arrive pas a envoyer de photo, elle prend trop de place dsl. 

[Sashounet]

il y a 2 minutes, etdarre a dit :

Bonjour, 

Oui c'est ça. Je n'arrive pas a envoyer de photo, elle prend trop de place dsl. 

Si jamais tu peux utiliser un éditeur (Zupimages ou Imgur) pour ensuite coller le lien sur ton post pour que les personnes qui te lisent puis voir de quoi tu parles

[Lesapeur]

Merci de l'info @Sashounet.

Donx voici le lien du qcm https://zupimages.net/viewer.php?id=20/19/ip7o.jpg

[Jujugulaire]

Salut @etdarre, 

 

Ce que je comprends c'est que tu veux exprimer la GFP en utilisant non pas un promoteur spécifique de la GFP mais le promoteur spé de Rnd1, en gros pour étudier spécifiquement le foie et le cerveau j'imagine car ce sont les seuls endroits où est exprimé Rnd1. En effet, comme tu fais une recombinaison à l'aide de Crispr Cas9, tu insère le transgène dans le zygote donc toutes les cellules de la souris transgéniques seront porteuses du transgène. Du coup, si tu mets le promoteur de la GFP ben elle sera exprimée dans toutes les cellules (car elle n'a pas de lieu spécifique d'expression) et la souris sera entièrement verte. Du coup, tu as besoin de garder ton promoteur du gène Rnd1 pour que la GFP soit exprimée uniquement dans le foie et le cerveau c'est pour cela que tu fais une cassure double brin en épargnant le promoteur du gène Rnd1 (c'est comme ca que j'interprète le "en dehors", càd sans le couper, mais la GFP reste sous son contrôle) 

 

Je sais pas si c'est très clair (ni exact) mais voila comment je le justifierais, si ca peut t'aider,

 

Bonne journée !

[Lesapeur]

il y a 4 minutes, juliettef a dit :

Salut @etdarre, 

 

Ce que je comprends c'est que tu veux exprimer la GFP en utilisant non pas un promoteur spécifique de la GFP mais le promoteur spé de Rnd1, en gros pour étudier spécifiquement le foie et le cerveau j'imagine car ce sont les seuls endroits où est exprimé Rnd1. En effet, comme tu fais une recombinaison à l'aide de Crispr Cas9, tu insère le transgène dans le zygote donc toutes les cellules de la souris transgéniques seront porteuses du transgène. Du coup, si tu mets le promoteur de la GFP ben elle sera exprimée dans toutes les cellules (car elle n'a pas de lieu spécifique d'expression) et la souris sera entièrement verte. Du coup, tu as besoin de garder ton promoteur du gène Rnd1 pour que la GFP soit exprimée uniquement dans le foie et le cerveau c'est pour cela que tu fais une cassure double brin en épargnant le promoteur du gène Rnd1 (c'est comme ca que j'interprète le "en dehors", càd sans le couper, mais la GFP reste sous son contrôle) 

 

Je sais pas si c'est très clair (ni exact) mais voila comment je le justifierais, si ca peut t'aider,

 

Bonne journée !

Oui je comprend ton explication et j'y ai pensé aussi mais ca me paraît tellement évidant que ça m'etonne que la question soit posée d'autant plus que c'eet un TD. 

[Jujugulaire]

 

il y a une heure, etdarre a dit :

Oui je comprend ton explication et j'y ai pensé aussi mais ca me paraît tellement évidant que ça m'etonne que la question soit posée d'autant plus que c'eet un TD. 

 

Si ce n'est pas ça alors je ne vois pas et l'explication m'intéresse aussi 

[TontonChène]

Bonjour !

 

Il faut comprendre l'item comme : "il ne faut pas faire la RH au niveau de la séquence du promoteur", sous entendu qu'il faut épargner la séquence du promoteur.

 

Bon courage !

[Lesapeur]

D'accord merci @TontonChène